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第三章 发酵液的预处理和菌体的回收 主要内容 1 2 3 悬浮液的基本特征 悬浮液的预处理 过滤法 1 悬浮液的基本特征 悬浮液指固体颗粒度在10-5cm以上的固-液分散体系。 生物细胞培养液： 水 微生物、动物和植物细胞 培养基 代谢产物 固体部分 液体部分 1.1 水的性质 （1）水的极性 偶极矩：6.17×10-3 C. m 氢键 易附着在物料表面 偶极矩：正、负电荷中心间的距离r和电荷中心所带电量q的乘积，叫做偶极矩μ＝r×q。它是一个矢量，方向规定为从正电荷中心指向负电荷中心。 （2）水的黏性 牛顿型流体 温度的函数 牛顿型流体：是指在受力后极易变形，且切应力和变形速率成正比的低黏性流体。 （3）水的表面张力 作用于液体表明，使液体表面积缩小的力 随温度的升高而降低 与在固体表面的附着及在空隙内的深入有关 调加表面活性剂可以降低水的表面张力 1.2 悬浮液中的固相 尺寸小，形态多样，易变形。 1.3 固液分离中存在的问题 （1）细胞的相对密度与悬浮液相近； （2）细胞具有可压缩性； （3）动植物细胞的强度弱 2 悬浮液的预处理 2.1 目的 改变发酵液的物理性质； 使产物转入便于后处理的某一相中； 去除发酵液中的部分杂质 2.2 预处理方法 （1） 加热法 简单、低廉； 降低悬浮液的黏度和最终体积、破坏凝胶状结构 和增加滤饼的孔隙率； 注意产物的热稳定性 （2） pH值调节 促进细胞的聚集； 草酸、无机酸和碱 （3） 凝聚和絮凝 作用机制：改变细胞、菌体和蛋白质等胶体粒子的分散状态，破坏其稳定性，促使其聚集成大的絮凝体。 凝聚：在投加化学物质（凝聚剂）作用下，胶体脱稳并使粒子相互聚集成1 mm大小块状凝聚体的过程。 絮凝：使用絮凝剂将胶体交联成网，形成10 mm 大小的絮凝团的过程。 VS 凝聚剂：金属盐类，如铝、铁盐类； 中和粒子表面的电荷或破坏双电层； 价格便宜。 絮凝剂：大分子量的聚电解质，； 架桥作用； 价格相对昂贵。 絮凝现象 凝聚剂 絮凝剂 种类 名称 种类 名称 阳离子型 聚合氯化铝 阳离子型 聚乙烯吡啶 阴离子型 活化硅酸 阴离子型 聚丙烯酸 无机复合物 聚合氯化铝铁 非离子型 聚丙烯酰胺 无机有机复合物 聚合铝-聚丙烯酰胺 两性型 明胶 高分子凝聚剂和絮凝剂的种类 微生物絮凝剂： 一类由微生物产生的具有絮凝功能的高分子有机物。 a 直接利用微生物细胞； b 利用微生物细胞壁提取物，如葡聚糖、甘露聚糖等； c 利用微生物代谢产物，主要是多糖。 （4） 使用惰性助滤剂 惰性助滤剂：一种颗粒均匀、质地坚硬、不可压缩的粒状物质，用于扩大过滤表面的实用范围。 作用机理： 吸附胶体的能力； 形成格子型结构 使用方法： 在滤布上预涂上一层助滤剂； 加入待滤的悬浮液中 种类： 硅藻土、膨胀珍珠岩、石棉、纤维素、未活化的碳、炉渣、重质碳酸钙等 3 过滤法 3.1 悬浮液分离方法的分类 按照颗粒的密度： 沉降：用于分离2.3 um ~ 1 mm的大颗粒； 水力旋流分离：用于分离5~ 700 um的颗粒； 离心：用于分离400 ~ 900 nm的颗粒； 超速离心：用于分离10 nm ~ 1 um的颗粒 按照颗粒的大小： 过滤：用于分离10 um ~ 1 mm的大颗粒； 微滤：用于分离200 nm~ 10 um的颗粒； 超滤：用于分离10 nm~ 5 um的颗粒 按照颗粒的表面性质： 用于分离1 ~ 200 um 的颗粒； 3.2 过 滤 （1）基本理论 达西(Darcy)定律 U = 流体的速度(m/s) ?p = 压力差(Pa) l = 床层厚度(m) K = Darcy’s 渗透系数，与流体和床层的性质有关 达西定律中的K表示了液体通过介质层的难易程度，与多孔介质的颗粒大小和孔隙率有关，所以Kozeny提出： 科泽尼方程： K“：科泽尼常数，一般K= 5（在大量均匀的球形颗粒中），其他颗粒K”= 3.5-5.5； S ： 单位体积颗粒中颗粒的表面积； ： 发酵液黏度(Pa s)； ? ： 床层的空隙率，即空隙体积与总体积的比值。 意义：过滤的基础方程，揭示了过滤流速与各因素的关系。 3.3 常用新型过滤器 （1）过滤器的选择 进料的性质：固体颗粒浓度低时常使用间歇式压滤器； 生产规模 滤液和滤饼的要求 设备的结构材料 过滤介质的性质 （2）过滤器的类型 真空过滤器： a. 转鼓真空过滤器 大规模生物分离的主要过滤设备。 优点：Ａ、大规模，Ｂ、自动化、操作简单，Ｃ、滤布装卸容易、易保养维护。 缺点：压力低，仅应用于低黏度发酵。 b. 圆盘真空过滤器 c. 水平带式真空过滤器 压滤器：压力超过0.1 MPa a. 板框