凡纳滨对虾桃拉综合征病毒主要结构蛋白基因克隆及原核表达.pdfVIP

摘要 凡纳滨对虾是全球最重要的经济养殖虾品种之一，在世界范围内大量养殖。 但其病害也日益严重，对虾病毒病暴发流行给世界对虾养殖业造成巨大经济损 失，对海洋资源的可持续发展造成巨大威胁，因此对虾病毒病的研究己成为当前 世界虾病研究领域的热点之一。桃拉综合征是最主要的一种影响凡纳滨对虾产量 的病毒病，其致死率高达90％以上。桃拉综合征最初仅在南美洲的厄瓜多尔发现， 但通过运输感染了病毒的仔虾和亲虾将病毒扩散到美洲，并进一步扩散到全世 界。目前，桃拉病毒的诊断方法有组织病理学方法、cDNA探针的原位杂交法、 RT．PCR法，但是这些方法均不符合口岸部门快速检疫的要求，因此急需一种快 速准确的检疫方法。 本研究根据GenBank中桃拉病毒的全基因组序列，分别设计扩增该病毒主 要结构蛋白基因vpl、vp2、vp3的相应引物，以发病的凡纳滨对虾中提取的总 RNA为模板，利用RT．PCR技术对目的基因进行了扩增，分别获得分子量为 1 目的片段测序结果的Blast分析表明已成功获得相关蛋白的基因片段。将此阳性 导表达后进行SDS．PAGE检测。SDS．PAGE电泳的结果表明，在37℃下， 0．5mmol／dm3的IPTG诱导表达的重组蛋白均以包涵体的形式存在，重组蛋白 镍柱纯化，将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，Western免疫印迹反应