“三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和增殖影响的研究.pdf

湖北中医学院博士论文 “三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖影响的研究 一、 中文摘要 目的 以中药熏洗、手法弹拨、练功疗法(以下简称“三联法”)治疗兔膝骨关 节炎(0steoarthritis，OA)，通过对膝关节软骨标本进行透射电镜超微结构观察， 采用流式细胞术、免疫组化、末端原位标记、原位杂交分别检测软骨细胞凋亡与 增殖状况。观察“三联法”治疗兔膝OA的效果及其对OA软骨细胞凋亡和增殖的 影响，并通过与三法的单独运用、外用扶他林对照比较，研究它们治疗0A疗效 的差别，为临床中医药外治0A提供实验依据。 方法取56只四月龄健康日本大耳白兔，随机分为7组(每组8只)：8只不 造模作为正常对照组，其余48只用结扎右侧股静脉的方法造横，8周后复制成 右膝骨关节炎模型，随后分为模型对照组、中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨 组、三联法组、扶他林组，治疗4周后取兔右膝关节的关节软骨，取外侧胫骨平 台制作石蜡切片，股骨外髁作超薄切片，剩余关节软骨作软骨细胞分离。分别进 行透射电镜观察，采用流式细胞术、免疫组化、末端原位标记、原位杂交分别检 测软骨细胞增殖和凋亡状况。 结果(1)超微结构观察三联法组软骨细胞超微结构接近正常对照组，可见细胞 形态正常，细胞核呈卵圆形，染色浅，核仁清晰，内质网较多，胞膜完整，基质匀称； 模型对照组细胞形态不规则，染色质浓聚，核仁消失，细胞器减少，部分内质网扩 大呈囊状；其他各治疗组除可见部分内质网轻度扩大外，各组间软骨细胞超微结 构相比无明显差别。(2)软骨细胞凋亡与增殖的影响软骨细胞TuNEL免疫组化观 察凋亡细胞核呈棕黄色，主要位于软骨浅层，各层均有分布。三联法组的表达最 察PcNA阳性细胞主要位于软骨浅表层，三联法组的表达最高，与其他各组间比 照组、中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拔组、扶他林组、三联法组显著高于正 组最为显著(PO．01)，但中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、扶他林组之 间无明显差异(P0．05)。 结论“三联法”能延缓和减少兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡，促使软骨细胞增殖， 并维持OA软骨细胞增殖和凋亡的平衡。治疗兔膝骨关节炎比单独运用中药熏洗、 手法弹拨、练功疗法和外用扶他林效果更明显． 关键词 “三联法”：骨关节炎；软骨细胞；细胞凋亡；细胞增殖 湖北中医学院博士论文 “三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖影响的研究 二、ABSTRACT rabbitSOsteoan㈦tisorOAweremodeled ObiectiveJapanesewim by femoralveinandtreatedwith for of Iigation trigeminy or 胁bo andFunctionaj FumigationWashingUse， Manjpulation Exercisesfor ofarticulationof Rehabilitation)．Themorphouschanges were wml and knee obseⅣed micToscope canilages锄ples light 仃a11smissionelec仃on a11d and of microscopethe印optosisproliferation 廿1e cellswere