生物指纹图谱调研报告.docVIP

中药生物指纹图谱调研报告 一、中药生物指纹图谱简介 中药生物指纹图谱biological fingerprint of TCM）是利用基因组学和蛋白组学技术研究药材基因型特征和中药作用于特定生物细胞后引起基因和蛋白的表达的变化规律和作用机制从分子水平上揭示中药、中药与生物的细胞作用后的基因与蛋白的表达特征，研究解决化学成分和药理作用、药效活性的相关性是中药指纹图谱研究的一个重要方面和最高级阶段。主要包括中药基因组学指纹图谱、中药蛋白组学指纹图谱 和中药材 DNA 指纹图谱[]。 目前，由于宏观上中药作用靶点和作用机制的多样性及对基因作用的多样性，中药基因组学指纹图谱和蛋白质组学指纹图谱可反映中药制剂作用于某特定细胞或动物后所引起的基因或蛋白的特定构象的复杂变化情况。这两种指纹图谱可称为生物活性指纹图谱。这种指纹图谱不但包含了化学信息也体现了和此相关的药效、临床疗效等生物医药信息通过比较不同蛋白质、基因指纹图谱体现的不同药效结果就可确定何种物质基础 (化学成分群 )是该中药制剂的最佳方式而且为解决中药研究中缺乏标准品的难题提供了一条可行之路[]。目前中药基因组学和蛋白质组学有关指纹图谱的研究工作正在开展。中药蛋白质组学及基因组学指纹图谱可从分子水平上丰富整个中药指纹图谱研究体系。无论是中成药二次开发，还是中药新药研究，都有一个关键问题需要解决--逐步在分子水平上研究解决化学成分(物质基础)和药理作用、药效活性的相关性。而其中，通过蛋白质组学的研究得到的蛋白质组学指纹图谱又具有很高的说服力。 中药材 DNA指纹图谱多运用聚合酶链反应 ( PCR) 从不同生物样品中人工合成 DNA 片段, 这种 DNA片段的大小、数目因不同生物而异, 因而称之为 DNA 指纹图谱。由于 DNA分子标记技术直接分析的是生物遗传因子而非表现型, 所以结果可不受环境因素、 样品状态和材料来源等外界条件的影响, 因此为中药品种鉴别中极为可靠的手段。随着分子生物学技术的发展, 已有文献报道用 DNA指纹图谱作为药材的鉴定方法.李晓波[]等人的研究预示 DNA 指纹技术正在逐渐成为中药鉴定的一种新方法。DNA 指纹图谱由于其特点无法客观反映药用植物因外部环境影响基因表达造成的药效成分含量的差异只能用于药材种质资源的考察对于 DNA 指纹技术在中药材鉴定方面的推广和普及的关健是降低检成本和简化操作过程。目前应用于中药质量研究的 DNA分析技术主要有分子杂交和 PCR 两方面。前者有以低拷贝序列基因为对象的RFLP(限制性内切酶片段长度多态性 ),以中度重复序列为对象的卫星 DNA 指纹图后者有 RAPD (随机扩增 多态性DNA)AFLP(扩增片断长度多态性 )和 DNA 测序等 。 二、中药生物指纹图谱应用中药谱效关系研究弥补了目前以化学指纹图谱控制中药质量时与药效脱钩的不足可为中药质量控制提供更为科学有效的数据。但是中药谱效关系研究需要制备足够量的样品开展药理实验因此不适于中药复杂体系效应成分的高通量筛选与确证。为此高通量筛选中药效应成分的生物指纹图谱技术的出现为中药有效性评价提供了另一思路和方法。生物色谱法是应用最早的生物指纹图谱技术包括分子生物色谱、生物膜色谱和细胞生物色谱等其基本原理是将生物大分子或靶体甚至细胞 (酶、受体、DNA、仿生物膜、细胞等固着于色谱担体上作为一种生物活性填料用于液相色谱形成一种能够模拟药物与生物大分子、 靶体或细胞相互作用的色谱系统这样就可以利用色谱参数快速、精确、稳定地表征药物与生物大分子靶体或细胞间的相互作用。由于能与生物体系发生相互作用是化学成分发挥药效的前提，因此可借此从复杂的中药化学成分中筛选潜在的效应成分(组)。例如，孔亮等[3]根据不同药物与人血清白蛋白( HSA)结合力的差异应用HSA分子生物色谱分析中药活性成分。在相同的色谱条件下用 HSA柱分别分离了当归、黄芪川芎和赤芍四种单味中药的水提物发现它们的分离情况各有特征。当归、黄芪谱图中各有 4个明显的保留组分赤芍谱图中有 2 个保留组分。与HPLC相比HSA分子生物色谱排除了大量非作用成分的干扰同时与 HSA的相互作用可表征化学成分在体内的分布、代谢及排泄等过程。为此HSA分子生物色谱法可用于筛选中药中可能的生物活性成分。
目前，对中药生物指纹图谱的研究开展较少，较成熟的方法有聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 同工酶法和随机扩增多态 DNA技术（RAPD ）等方法。 石俊英等［］在国内首先将PAGE法应用于植物、动物类中药材的真伪鉴别。 DNA指纹图谱技术比传统的四大鉴别方法更为准确、客观适用范围更广非常适合于近缘种、易混淆品种、珍稀品种、动物药材、破碎药材、陈旧药材、腐烂药材及样品量极为有限的植物模式标本、中药出土标本、古化石标本等珍贵样品的鉴定[]。它不仅