模块4花药和花粉培养课件教学.pptVIP

目的要求： 了解花药和花粉培养的意义 掌握花药和花粉培养的概念 掌握花药和花粉培养的方法及外植体发育的途径 第一节 花药和花粉培养技术 花药培养指应用组织培养技术，将花粉发育至一定阶段的花药接种到人工培养基上进行培养，以诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织，进而分化成苗的技术。花粉培养则需将花粉从花药中游离出来，再进行离体培养（图5-1）。 二者的共同特点用花粉（小孢子）染色体数目的单倍性，培育出单倍体植株。 花粉囊壁的发育及结构功能 一、培养方法 花粉发育时期 被子植物花粉粒的发育：被子植物的花粉发育由孢子四分体分散成单核小孢子开始（图5-2） 花粉发育的四个时期 一、培养方法 花粉发育时期 适宜的花粉发育时期：对大多数植物而言，适宜的花粉发育时期是单核期，尤其单核中、晚期（如水稻、小麦、玉米、烟草、苹果、梨、核桃、草莓等）。单核晚期花粉中已形成大液泡培养过程 一、培养方法 花粉发育时期 花粉发育时期的检测：压片染色法是检测花粉发育时期的简便有效方法，常用染色剂是醋酸洋红。 对花粉不易被醋酸洋红染色的材料如水稻花粉，可用碘一碘化钾染色。处于单核期的花粉尚未积累淀粉，被碘染成黄色，借助细胞核、质密度不同，即可辨别核的位置。进人三核期后的花粉开始积累淀粉，被碘染成蓝色。 一、培养方法 花粉发育时期 花粉发育时期的检测： 此外，可将压片染色法与材料外部形态相结合，确定处于花粉发育适宜期的花器官相关形态特征，供田间采样时参照。如处于花粉单核晚期的烟草花蕾花萼与花冠等长，而此期的水稻颖花特征是颖壳淡黄绿色，雄蕊长度达颖壳1/3-1/2 一、培养方法 花粉发育时期 材料的选择是花药和花粉培养中的重要环节。除花粉发育时期外，材料的基因型（种、品种）、生理状况（母株年龄、营养状况等）对花粉植株的诱导都有影响，在取材时应充分注意。 一、培养方法 培养过程 1．花药培养 材料预处理→表面消毒→接种→培养→植株的诱导 预处理：接种前将采集的花蕾或花序以理化方法处理能提高花粉植株诱导频率。最常用的是低温处理。例如，将禾谷类植物带叶鞘和穗子或其他植物的花蕾用湿纱布包裹放人塑料袋中，置冰箱冷藏。如烟草在7一9 ℃放置7一14 d，小麦、大麦在70C放置7一14 d，水稻在10℃放置14一21 d 。 一、培养方法 培养过程 1．花药培养 材料预处理→表面消毒→接种→培养→植株的诱导 接种：在超净工作台上用镊子剥去部分花冠，露出花药，夹住花丝取出花药置培养皿中。不要直接夹花药，以免损伤。用长柄（枪状）镊子夹住花丝，将花药接种于培养基上，或用接种环蘸取花药接种于培养基上（图5-3、5-4 )。接种密度宜高，以促进“集体效应”的发挥，有利于提高诱导率。 一、培养方法 培养过程 1．花药培养 材料预处理→表面消毒→接种→培养→植株的诱导 植株诱导：培养花粉植株的形成有两条途径，一是花药中的花粉形成愈伤组织，愈伤组织经再分化诱导成苗；二是花粉分化成胚状体而直接成苗。 一、培养方法 培养过程 1．花药培养 培养条件：大多数植物花药接种后，置于25一28℃，光暗交替条件下培养为宜，光强2000一10000 Ix，光照时间12一18h。离体培养的花药对温度最敏感，对一些温度要求较高的植物如烟草、小麦、油菜、曼陀罗，在接种后先置30一32℃高温下培养2一5周，再置较低温下培养，其愈伤组织发生率和绿苗率显著提高。水稻花药培养温度则宜控制在30℃以下，以26一28℃为宜，过高温易导致白化苗发生频率增加。光照对愈伤组织的形成并非必要条件，研究证明禾谷类植物的花药培养，黑暗较光照条件下出愈率更高。但由愈伤组织分化成芽或胚状体以及再生植株壮苗培养阶段，都必须要光照。 一、培养方法 培养过程 2．花粉培养 意义：花粉培养是单倍体单细胞的培养，除用于诱导单倍体植株外，也是研究花粉细胞化、胚胎发生、形态建成的理想实验系统。 花药和花粉培养的异同：离体培养的花粉粒成苗途径与花药培养相同，即有胚状体成苗和愈伤组织再分化成苗两条途径。对诱导单倍体植株而言，花粉培养与花药培养在形成花粉胚或愈伤组织之后的培养过程是相同的。不同之处在于花粉培养需进行花粉的分离和特殊的花粉诱导培养。 一、培养方法 培养过程 2．花粉培养 （l）花粉的分离 分离方法有挤压法、磁搅拌法、漂浮释放法等。前两者为机械分离方法。 挤压法是用平头玻棒将置于液体培养基中的花药挤压破碎后去掉残片，或将经过预培养的花药置一定浓度蔗糖液中，压碎、过筛、离心（500~1000rpm，1~2min）、收集沉淀。 磁力搅拌法是将接种于液体培养基中的花药置磁力搅拌器上，低速转至花药透明。 两法均对花粉粒有一定程度损伤，但分离彻底。 一、培养方法 培养过程 2．花粉培养 （l）花粉的分