上课DNA的粗提取与鉴定讲述.ppt

DNA和蛋白质 资料四:DNA的鉴定原理 当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？ 在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。 注意:二苯胺要现配现用,使用时取4ml二苯胺加一滴已乙醛摇匀再倒入待测样液 氯化钠+DNA+二苯胺 氯化钠+二苯胺 ⑧ DNA的鉴定 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，香蕉 33条，菠菜12条，大肠杆菌1条。 你能分析你的实验结果吗？ 结果分析与评价 1、你提取出了白色丝状物吗？用二苯胺鉴定的结果如何？? 2、如果鉴定结果不出现蓝色,讨论可能是什么原因.? 3、你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些杂质吗 4、哪些因素会影响实验效果? ? DNA的粗提取与鉴定 DNA粗提取与鉴定 通过本节课的学习我们要知道： DNA提取原理 据原理设计DNA提取方法 能对DNA进行鉴定 掌握本实验的基本操作方法 DNA在细胞的什么地方？ 基础知识 提取DNA的方法 1、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子 主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取DNA的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分 DNA提取原理 蛋白质在0.14mol/L中的溶解度大 DNA在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。 资料一： DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 根据资料一思考 要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？ 在溶解细胞中的DNA时，通常可选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。 此原理，可以达到什么目的？ 2、DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA和蛋白质进一步分离。 资料二 酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质而不会对DNA产生影响 。 方案二： 直接向滤液中加入 ，反应10～15min， 中 能够分解蛋白质。 此方案利用了酶的什么特性？ 嫩肉粉（木瓜蛋白酶） 嫩肉粉 蛋白酶 专一性 资料三 蛋白质、DNA热稳定性不同。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。 方案三： 将滤液放在 的恒温水浴箱中保温10～15min，注意严格控制温度范围，使 沉淀而 分子还未变性，可以将DNA与蛋白质分离。 60～67℃ 蛋白质 DNA 实验设计 根据资料提供的DNA理化性质，你能思考提取DNA的基本方法吗？ 选取实验材料 资料四: 洗涤剂瓦解细胞膜。 动物细胞吸水会胀破。 思考:如何使DNA从细胞里释放出来得到含有DNA的滤液? 利用什么原理可以使动物细胞或植物细胞破裂? 动物细胞：加水胀破细胞 植物细胞：加入一定量的食盐和洗涤剂破坏 细胞膜 选择什么动物细胞？ 猪肝？鸡血？猪血？······ 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。 血浆 血细胞 1、提取细胞核物质： 选择方案一 利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 方法步骤： 5 mL～10mL鸡血细胞液+蒸馏水20 mL 血细胞加速破裂 然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。 ①提取鸡血细胞的细胞核物质 蛋白质和DNA 细胞膜 讨论： （1）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA。 （2）滤去的是什么物质？得到的是什么？ 答：过滤滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA ②溶解细胞核内的DNA 将40mL 2 mol /LNaCl加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。 DNA溶解 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停