PCR及实用方法要素.pdf

, 2003 , 1 , 3 , 381 — 394 M olecular P lant Breeding , 2003 , V ol.1 , No.3 , 381 — 394　 () M ET HODS IN LAB OF M OL ECULAR P LAN T BREEDING (2) PC R 1,2 　 1 2 1 , , 572025 , , 350019 PCR PCR 。 ,、 PCR , 。 。 PCR , PCR Technique and its Practical M ethods Zheng Jingsheng 1, 2 　Lǜ Bei1 1 Hai nan Provincial K ey Laboratory of Crop M olecular Breeding , Sanya , 572025 2 The Instit ute of Rice w heat , Fujian A cademy of Agricalt ural S ciences , Fuzhou , 350019 ABST RAC T T his paper introduced PC R principles , reaction component s , reaction prog rams and elect rophoresis detecting techniques.All of the practical prot ocols were derived f rom m any f amous domestic and international laboratories and modified by H ainan P rovincial Key L aboratory of Crop Molecular Breeding (HiCM BL).It has more beneficial to adapt t hose protocols as technology platfo rm in t he lab of molecular plant breeding due to its good practicability , which could meet t he demands of the researches in fields of molecular biology and biotech nology. K EYWO RDS PCR , P ract ical met hod , M olecular plant breeding 1 PCR , Reaction , PC R) 1985 Kary Banks Mulis DN A (Polymerase Chain PE-Cet us 。 , , DN A DN A 。 PCR DNA 、 、、 , , 　38 2 　 M olecular Plant Breeding PCR DNA 199 4 , 。 Kary Banks M ulis 。 :DN A DN A , DNA , 。 , DNA 3 -OH , , 5 ※3 , DNA 。 PC R : DNA ( DNA )、 、4 (dN TP s)、 DNA 。 PCR , (denatu ration)、 DN A (anneal- in g) (extension) 。, 。PCR DN A , 。 2 PCR 2.1 DNA PCR DNA cDNA , mRNA DNA , PCR , NA 。 PCR m RNA cD- , DNA , DNA 、 、 DNA 、 。 DN A , , PCR DNA , SDS PCR T aq 。, DNA 10 mmol/ L T ris-HCl (pH7.6)、 0.1 mmol/ L EDTA (pH8.0) 。 PCR DNA ( ), D NA 30 -50ng , 1 DNA PCR , 1 DNA DNA 。 PC R 40 (HPV)DNA , , DN A PCR 。 2.2 PCR DNA , 10 -30 。, 5 3 , DNA PCR 。 , 17 1。 , 16 , PC R 。 , PCR 。 PCR 。 DN A , DN A 。 ,、 。 G +C (G +C %) , GC , GC 。 , , G +C 40 %-60 % , (melting temperat ure , Tm) 55 ℃。 ,。 , 3 , , 3 2, “ ”。 DNA 。 , DNA 3 , 3 5 -6 DN A 、。 ,。 ( , 2002)。 4, ,, ,。 “ PCR , ”。 , PCGENE 、 DNAM a