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人教版必修二第六章第2节基因工程及其应用概要
?如何让大肠杆菌生产人胰岛素? DNA聚合酶 DNA连接酶 3、基因的运载工具——运载体: 种类:常用的运载体主要有两类: 1)质粒 2)噬菌体或某些动植物病毒 基因工程最常用的运载体是_______ 质粒 1、质粒存在于细菌、酵母菌等生物中,是细胞染色体外能够进行自主复制的很小的环状DNA分子。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒。其中常含有抗药基因,如四环素的标记基因和抗青霉素基因。 2、质粒的存在对宿主细胞无影响,但复制只能在宿主细胞内完成。 质粒适于做运载体的原因: 标记基因,便于进行检测。 (1)能在宿主细胞中复制并稳定保存 (2)具有多个限制酶的切点,便于与外源基因连接。 (3)具有某些标记基因,便于筛选 运载体的特点(具备条件) 作用: 作为运载体,将目的基因送入受体细胞,用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 原理: 利用运载体侵染宿主细胞的能力,将目的基因导入宿主细胞。 1)提取目的基因 2)目的基因与运载体结合 3)目的基因导入受体细胞 4)目的基因的检测和表达 (四)基因工程的步骤 目的基因是人们所需要转移或改造的特定基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因,还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、种子贮藏蛋白的基因,以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 步骤一:提取目的基因 方法: 1、直接分离:鸟枪法 2、人工合成: 注意:要保持基因的完整性 1.用一定的_________切割 质粒,使其出现一个切 口,露出____________。 2.用_____________切断目 的基因,使其产生_____ ____________。 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处, 再加入适量___________,形成了一个重组 DNA分子(重组质粒) 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 步骤二:目的基因与运载体结合 目的基因与运载体的结合过程,实际上是不同来源的基因重组的过程。 提问:要想将某个特定基因与质粒相连,需要几种限制性内切酶和几种DNA连接酶处理? 思考:所有受体细胞都能摄入重组DNA分子吗? 在全部受体细胞中,真正能摄入重组DNA分子 的受体细胞是很少的。 步骤三:目的基因导入受体细胞 1、常用的受体细胞: 大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌、动植物细胞等 2、常用微生物作受体细胞的原因: 微生物增殖快、代谢快、目的产物多 2、受体细胞摄入重组DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗? 不能。有些受体细胞即使摄入重组DNA分子但目的基因并不一定能完成表达。 3、受体细胞摄入重组DNA分子后,目的基因完成表达的标志是什么? 受体细胞必须表现出目的基因所控制的特定性状,才能说明目的基因完成了表达。 步骤四:目的基因的检测和鉴定 提问:1、检测一般依据的原理是什么? 检测:依据受体细胞是否具有质粒中的标记基因,判断目的基因是否导入。 标记基因是否表达 例:用棉铃饲喂棉铃虫,如虫吃后不出现中毒症状,说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡,则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 基因工程培育抗虫棉的简要过程: 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 从细胞中分离出DNA 从大肠杆菌中提取质粒 限制 酶 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连 接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 1 2 基因工程的操作工具 1.基因的剪刀 ——限制性内切酶 2.基因的针线 ——DNA连接酶 3.基因的运输工具 ——运载体 基因工程的操作步骤 1.目的基因的提取 2.目的基因与运载体结合 3.目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与表达 基因工程(gene engineering)的原理 1)以下说法正确的是 ( ) A 所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B 质粒是基因工程中唯一的运载体 C 运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接 D 基因控制的性状都能在后代表现出来 C 课堂练习 2)不属于质粒被选为基因运载体的理由是( ) A 能复制 B 有多个限制酶切点 C 具有标记基因 D 它是环状DNA D 3)下列是由限制酶切割形成的DNA片段,能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是( ) ①…
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