第15章基因信息的传递解剖.pdf

? 一、DNA的半保留复制 （一）半保留复制的理论 半保留复制（semiconservative replication）方式，是 Watson和Crick 根据DNA双螺旋模型提出来的，即在 子代的DNA中，一条链来自亲代，另 一条链是新合成的。 （二）参与DNA复制的酶 主要有DNA聚合酶和DNA链接酶。 1. DNA聚合反应 在DNA聚合酶催化下，脱氧 核糖核苷酸被加到已有的核酸链的 游离3 ′-OH上，同时释放出无机焦 磷酸。 2. 大肠杆菌DNA聚合酶 大肠杆菌中有五种不同的DNA聚合酶，它们分别称为DNA 聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ。 3. 真核生物DNA聚合酶 真核生物钟存在5种DNA聚合酶，他们分别以α、β、γ、δ、 ξ命名。 哺乳动物的DNA聚合酶 4. DNA连接酶 催化双链DNA粘性末端切口处的5′-磷酸基和3′-羟基生成 磷酸二酯键。细菌的DNA连接酶以NAD为能源，动物细胞 和噬菌体的连接酶以ATP为能源。T4的DNA连接酶可以连接 平末端。 （三）复制的起始点和方式 1. 复制的起始 复制是在起始阶段进行控制的。DNA一旦复制开始，它即继 续下去，直到整个复制子完成复制。大肠杆菌的复制起点称 为ori C，由245个bp构成，其序列和控制元件在细菌复制起 点中十分保守。关键序列存在两组短的重复：三个13bp的序 列和四个9bp序列。 3×13bp 直接重复序列 Dna 结合位点，4×9bp 保守序列： GATCTNTTNTTTT 保守序列： TTATCCACA 2. 复制方式 DNA复制时，从复制起点开始，两条链解开，已解开的两条 链与未解链的双链间形成一个叉子的结构称为复制叉。 单向复制：只 形成一个复制 叉或生长点。 双向复制：即 形成两个复制 叉或生长点。 （四）复制过程 1. 模板DNA的解链和解旋 2. 半不连续复制 1968年，冈崎等人发现，以复制叉向前移动的方向为标准，3′→5 ′ 走向的一条模板链，在其上DNA新链能以5 ′→3′连续合成，称先 导链；另一条链5 ′→3′走向的模板链在其上新链的合成也是5 ′→3′， 但是与复制叉移动方向相反，且合成出许多不连续的片段，称为 冈崎片段，最后合成一条完整的链，称为后随链。 3. 引物合成 目前已知的DNA聚合酶都只能从引物的3′-OH末端延伸DNA链， 而不能从头合成。复制的引物是由引发酶合成的RNA片段， 长度为几个到十几个核苷酸。 4. 合成的终止 DNA聚合酶Ⅰ以其5 ′→3′外切酶活力将RNA引物切除，引物 切除后，引物切除留下的空缺也由DNA聚合酶Ⅰ从下一个冈 崎片段3′-OH端开始，按模板要求延伸DNA链，将缺口补齐， 再由DNA连接酶将相邻冈崎片段连接起来，形成完整的新链。 ? 二、依赖RNA的DNA的合成 逆转录：以RNA为模板合成DNA，称为逆转录。 （一）反转录酶的性质 反转录酶催化DNA合成反应要求有模板和引物，模板和 引物可以是RNA，也可以是DNA。以4种脱氧核苷三磷酸作 为底物，此外还需要2价阳离子（Mg2+和Mn2+），DNA链 的延长方向为5 ′→3′，这些性质都与DNA聚合酶相似。 （二）反转录过程 ? 三、DNA损伤（突变）修复 （一）引起DNA损伤的因素 1. 物理因素：紫外线、电离辐射； 2. 化学因素：亚硝酸、碱基类似物、烷化剂以及抗生素、 色素和染料。 3. 生物因素：噬菌体和病毒感染，转位因子的作用。 （二）DNA损伤的类型 1. 错配 错配是指DNA分子上的某一碱基发生置换，又称点突变。 2. 缺失、插入或和移框 移框突变是指三联体密码的阅读方式发生改变。造成蛋白质 氨基酸排列顺序发生改变，致使翻译出不同的蛋白质。 3. 重排 DNA分子较大片段的交换称为重组或重排。 （三）细胞的DNA修复系统 1.错配修复 DNA复制后，在短期内新合成 链的GATC序列中的腺嘌呤未被甲 基化，而模板链是被甲基化的。复 制过程发生错配，细胞错配修复系 统能够将未甲基化的链切除，并以 甲基化的模板链进行修复。该过程 需要依赖Mut SL复合物。 2. 直接修复 紫外线照射可以使DNA分子中同一条链 相邻胸腺嘧啶碱基之间形成二聚体。其他嘧啶 碱基之间也能形成类似的二聚体，但数量较少。 嘧啶二聚体的形成，影响了DNA的双螺旋结 构，使其复制和转录功能均受到阻碍。 3. 切除修复 切除修复，即是在一系列酶的作用下， 将DNA分子中受损部分切除掉，并以完整 的那条链为模板，合成切去的部分，然后 使DNA恢复正常结构的过程。 切除修复包括两个过程：一是由细胞 内特异的酶找到DNA的损伤部位，切除含 有损伤结构的核酸链；二是修复合成并连 接。 4. 重组修复 重组修复又称为“复制后修 复”，它发生在复制之后，机体细 胞对