1.1DNA重组技术基本工具答案.ppt

限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G GATCC— 请画出含有此序列的某段DNA被限制酶Ⅰ切割后所形成的粘性末端。 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端。 是不是把两者的黏性末端黏合起来，这样就真的合成重组的DNA分子了? 实际还不够,还需要DNA连接酶进行连接。 思考题： 使载体与该抗病基因连接，首先应使用限制酶进行切割。假如载体被切割后，得到的分子末端序列为，则能与该载体连接的抗病基因分子末端是…………( ) A 课本P7 （2）“分子缝合针”是 。 ①常见种类： ②作用实质：在两个DNA片段之间形成 。 2：基因工程的针线 E?coliDNA连接酶（大肠杆菌） T4DNA连接酶（T4噬菌体） DNA连接酶 磷酸二酯键 4、DNA连接酶分为E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，表述正确的是 A .E. coliDNA连接酶只连接黏性末端形成磷酸二脂键 B. E. coliDNA连接酶能连接黏性末端和平末端形成磷酸二脂键 C .T4DNA连接酶只连接黏性末端形成磷酸二脂键 D .T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端形成氢键 A 以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析： ①GC… ②AATTC… ③ …GC ④ …CTTAA CG… G… …CG …G (1)其中①和 是由一种限制酶切割形成的 末端，两者要重组成一个DNA 分子，所用DNA连接酶通常是 。 （2） 和 是由另一种限制酶切割形成的 末端，两者要形成重组DNA片段，所用的连接酶通常是 。 反馈练习： ③ ② ④ EcoliDNA连接酶 T4DNA连接酶 为扩大可耕地面积，增加粮食产量．黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。 (1) 获得耐盐基因后，构建重组DNA 分子所用的限制性内切酶作用于图中的 处，DNA 连接酶作用于 处。（填“a”或“b ” ) a a DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 寻根问底 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 限制酶 　　DNA连接酶 　　DNA聚合酶 DNA解旋酶 作用于磷酸二酯键 ：作用于氢键 8.如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用正确顺序是 ① ② ③ ④ A.①②③④ B.①②④③ C.①④②③ D.①④③② C （3）运载体—“分子运输车” ①常用的运载体： 细菌细胞质的质粒 还有λ噬菌体的衍生物, 动植物病毒等 ②应具备条件： 1、能够自我复制并稳定地保存 2、具多个限制酶切点，以便与外源基因连接 3、具有标记基因，便于进行筛选（ 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。） 4、载体必须安全，对受体细胞无害 ③作用: 将外源基因送入受体细胞 　1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 2.作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　3.目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 　4.霍乱弧菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 5、载体DNA分子大小应适合,以便提取和在体外进行操 作,太大就不便操作. 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 能在宿主细胞中自我复