白腐真菌生物技术与应用课件.ppt

白腐真菌菌剂的保存效果复活率—凤尾菇 四种包埋小珠的复活率不随着保存时间的延长而下降。 菌丝体生长长度（cm） 培养时间（d） 白腐真菌菌剂的保存效果复活率—平菇 K—卡拉胶包埋小珠的复活率随着保存时间的延长而下降。 菌丝体生长长度（cm） 培养时间（d） 规格 海藻酸钠（元） 聚乙烯醇（元） 明胶（元） K-卡拉胶（元） 材料（1g） 本次实验材料 0.16 0.32 0.08 0.36 0.128 0.38 0.4 0.8 四种材料的制备成本比较 制备成本分析 本实验包埋150mg干重的白腐真菌所需的海藻酸钠和K-卡拉胶各需 2g，明胶3g，聚乙烯醇（PVA）3.8g，此外PVA包埋时为防止粘交，要 加入0.38g海藻酸钠。 海藻酸钠小珠包埋法是最便宜实惠的包埋方法，PVA包埋法次之， K-卡拉胶包埋法是这四种包埋法中花费最多。 本研究结果证明：最适合白腐真菌包埋的方法是 海藻酸钠小珠包埋法和PVA小珠包埋法。 综合结果表明：在白腐真菌处理有机固体废物时， 海藻酸钠小珠包埋法是最适合选择。 －总结－ 吸附法 利用微生物和载体（support）之间的吸附能力，将微生物结合在载体表面，形成 微生物-载体复合物，这种固定方法称为吸附法（adsorption）； 常见载体包括：尼龙网、聚氨酯泡沫、硅管、烧结玻璃、多孔陶瓷、聚丙烯等，其 中尼龙网、聚氨酯泡沫、硅管、烧结玻璃较为常用； 聚氨酯泡沫小块 1cm3的聚氨酯泡沫小块，用无菌蒸馏水洗涤3次 加入600mL蒸馏水加45块聚氨酯泡沫，灭菌 无菌条件下过滤后，加入600mL培养基 接种孢子悬浮液进行培养 最终要求孢子悬浮液浓度达到2.5×105个/mL 以黄孢原毛平革菌的分离为例 担子菌的筛选 利用选择培养基初步分离担子菌类（粗筛） 常用选择培养基配方 干燥的麦芽汁提取物 3.0g 真菌蛋白胨 0.5g 琼脂 2.5g 蒸馏水 100mL 邻苯基苯酚 0.006g 注意点： 1、邻苯基苯酚的浓度可以根据具体情况进行调节，最大 浓度≤0.01%（质量浓度）； 2、使用乳酸调节培养基pH值，不影响对担子菌的筛选； 优点： 能从受霉菌严重污染的土壤及其他介质中分离担子菌； 真菌耐药性试验 细筛 利用担子菌对各类天然和合成杀真菌物质的忍耐性，进一步从筛选 体系中去除可能残留的细菌和放线菌。 常用的杀真菌物质为玫瑰红（四碘四氯荧光素），一般使用浓度30mg/L。 担子菌的纯化 使用苯菌灵-麦芽琼脂培养基对培养物进行进一步培养（纯化） 纯化的目的：是要去除培养物中可能存在的其他丝孢菌类（hyphomycetes）； 苯菌灵母液的配制：1g的50%苯菌灵粉末，加到500mL的蒸馏水中； 一般使用浓度与方法：将母液按照1mg/L的浓度加入2%（质量浓度）的麦芽琼脂培养基中； 担子菌的分离 以Poly R-478为指示剂分离能降解木质素的菌种（分离） 常用分离培养基配方 大麻茎木 0.2%（质量浓度） 琼脂 1.5 %（质量浓度） 苯菌灵 15mg/L 愈创木酚 0.01 %（质量浓度） 分离 使用0.02%（质量浓度）含Poly R-478 （聚合染料）的平板麦芽琼脂培养基 培养分离菌种 检定 使愈创木酚变成褐色的菌为目标菌种 使含Poly R-478的平板麦芽琼脂 培养基脱色即可确认分离成功 具体菌种的纯化 根据需要筛选的特定菌种类型，使用与之匹配的选择性分离培养基，对培养物 反复多次培养，直至获得目标纯菌种，然后采用16sRNA检测鉴定。 问题 假设已经获得某种白腐真菌的子实体，可以采取何种方法分离出纯菌种？ 培养 各类真菌子实体 切割 获取子实体块 PDA培养基 植入 获得菌丝体 菌丝体纯培养 2-2 具有降解异生物质能力的白腐真菌的筛选 筛选的必要性 白腐真菌对异生物质的降解长期以来集中在黄孢原毛平革菌，但是在实际应用过程 中其木质素降解条件很难得到满足。因此，筛选能在较宽泛环境条件下降解异生物质的 白腐真菌对于应用技术的开发具有重要意义。 筛选的基本策略 理想的筛选方法，既要便宜，建立在相对无毒的底物基础上，不依赖于烦琐的分析 之上，同时它应该与木质素降解酶所调节的异生物质的降解有高度的相对应性。 利用聚合染料的筛选程序（常用） 指示染料的选择 选择培养基 异生物质的降解与染料脱色相关性判断 2-3 白腐真菌木质素降解性能的鉴定 白腐真菌木质素降解酶的平板定性 方法一 Poly R-478指示细胞外氧