第十二章色谱分析法12-1-2课件.pptVIP

第12章 色谱分析法 12.1 概述一、色谱法简介 1906年，俄国植物学家M.Tswett发表了他的实验结果：为了分离植物色素，他将含有植物色素的石油醚提取液倒入装有碳酸钙粉末的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在CaCO3颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，从而形成一圈圈不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色谱法(chromatography)。在此后的20多年里，几乎无人问津这一技术。到了1931年，德国的Kuhn等用同样的方法成功地分离了胡萝卜素和叶黄素，从此色谱法开始为人们所重视，相继出现了各种色谱方法。 1906，俄国植物学家 M.Tswett 发明色谱法，色谱之父 1931，对液固吸附色谱的杰出贡献者库恩，分离出60多种胡萝卜素，核黄素、维生素，获1938年诺贝尔化学奖 蒂塞利乌斯(Tiselius)因电泳分析和分析方法的研究，发现血清蛋白组分，获1948年诺贝尔化学奖 1941，马丁(Martin)和辛格(Synge)创始分配色谱特别是纸色谱而共获1952年诺贝尔化学奖 氨基酸自动分析仪发明人S.穆尔(Stanford Moore)和W.H.斯坦(William Howard Stein)，定量分析方法解决了有关氨基酸、多肽、蛋白质等复杂的生物化学问题，获1972年诺贝尔化学奖 二、色谱法的定义与分类 2. 色谱法的分离原理 3. 色谱法的分类 1.按两相分子的聚集状态分类 2. 按固定相的固定方式分类 三、色谱过程与术语 色谱过程是物质分子在相对运动的两相间分配平衡的过程。在混合物中，若两个组分的分配系数不等，则被流动相携带移动的速率不等，即形成差速迁移而被分离。如图所示。 1. 色谱过程 色谱过程的实质 (1)色谱过程是吸附与解析的过程； (2)不同组分极性的差异导致吸附与解析的差异； (3)不同组分向前移动的过程是差异不断累积过程，是在动态中由量变到质变的过程。 2. 基本术语 2. 基本术语 1. 塔板理论的基本假设： （1） 色谱柱是由一系列连续、等距的水平塔组成，在柱内每层塔板内部，组分能够在流动相和固定相两相中达到平衡。 （2）流动相通过色谱柱呈间歇式前进运动，每次前进为一个塔板体积。 （3）样品和流动相同时加在第一个塔板上，且样品垂直于前进方向的扩散(即纵向扩散)可以忽略。 （4）分配系数在各塔板上是常数。 塔板理论的这些假设，实际上是把组分在两相间的连续转移过程，分解为间歇地在单个塔板中的分配平衡过程，经过多次分配平衡后，分配系数小的组分先达到塔顶（即挥发性大的组分先流出色谱柱）。色谱柱的塔板数可高达几千甚至几万，使被测组分在分配系数间有微小的差别时就可以得到分离。 2. 塔板理论的计算公式 理解：在tR一定时，W或W1/2越小(即峰越窄)，理论板数n越大，理论板高越小，柱的分离效率越高。有效理论塔板neff也同此理。因此，理论塔板数是评价柱效能的指标。 3. 塔板理论的优点和局限 优点：塔板理论是半经验性理论，在解释流出曲线的形状、浓度极大点的位置、评价柱效高低等方面是成功的。 局限：塔板理论的基本假设与事实不完全相符，它无法解释谱带扩展的原因，也无法解释色谱过程与流动相流速、柱内分子扩散传质过程以及色谱操作参数等动力学因素的关系。 这些问题，在速率理论中得到了圆满的解决。 二、速率理论 引起谱带展宽的主要因素 引起涡流扩散的原因是色谱柱内的多路径。溶质分子在前进过程中形成的这种紊乱类似于涡流的流动，所以称之为涡流扩散。 A=2?dp 空心毛细管柱无多径相：A＝0? 引起分子扩散的原因是浓度梯度。分子扩散是溶质分子在移动方向上向前和向后的扩散，引起谱带展宽。它是由浓度梯度所引起。分子扩散引起的峰展宽由下式决定： 式中B=2 ?Dg，为分子扩散系数；?为弯曲因子或阻碍因子，填充柱?=0.5～0.7，毛细管?=1；Dg为溶质在流动相中的扩散系数；u 为流动相线速度。随着样品带在固定相中的移动，因分子扩散使样品带宽逐渐增加，相应得到的色谱峰就越来越宽而矮。 结论： Van Deemter方程说明了色谱柱填充均匀程度、载体的性质与粒度、载气种类与流速、固定液层厚、柱温等对柱效的影响，对分离条件具有指导意义。 三、色谱基本分离方程 分离度是综合性指标，是色谱柱的总分离效能指标。 色谱分析的目的就是要将混合物中的各组分分离，为了获得较好的准确度，一般规定两相邻峰的分离度 Rs≥1.5时，可认为两组分完全分离。 3. 色谱基本分离方程式 A B C 柱管壁 固定相 组分移行轨迹 初始带宽 谱带展宽 流动相方向 1. 涡流扩散 分子扩散引起的色谱峰展宽示意图 2. 分子扩散 传质阻力系数C，是溶质在固定