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色谱分析法导论 光分析方法的分类 色谱分析方法的分类 分离分析方法的发展 1. 分析对象的复杂性 天然产物——提取具有生理活性的组分；紫杉醇 中草药——有效组分的测定、分离 2. 药物、高纯试剂的制备 青霉素过敏的原因：含微量其他组分； 提纯后——可口服 3. 分析过程中的干扰 仪器分析的选择性和灵敏度不断提高， 但在很多情况下有干扰存在。干扰组分分离 常用的分离分析方法 蒸馏、重结晶、萃取 性质特别接近物质如何分离? 1.沉淀分离法 传统分离方法，采用沉淀剂；液-固分离。 2.溶剂萃取分离法 被分离物质由一液相转入互不相溶的另一液相的过程； 液-液两相；互不相溶。 超临界萃取。 常用的分离分析方法 3.离子交换分离法 通过带电荷溶质与固体（或液体）离子交换剂中可交换的离子进行反复多次交换而达到分离。 4.膜分离技术 发展较快的一种分离方法； 模拟生物过程； 利用半透膜（高选择性）淡化海水。 5.色谱分离方法 柱层析；制备型气相色谱；制备型液相色谱； 色谱分析法简介 教学要求： 了解色谱流出曲线和术语 理解柱效率的物理意义和计算方法 理解速率理论方程对实际分离的指导意义 掌握分离度的计算方法，影响分离度的重要色谱参数 一、色谱法的发展历程 最早创立色谱法的是俄国植物学家Tswett 。 20年后，德国的Kuhn和Lederer才重复了Tswett的某些实验，用氧化铝和碳酸钙分离了α-，β-，和γ-胡萝卜素，此后用这种方法分离了60多种这类色素。 在色谱发展史上占有重要地位的英国人A.J. P. Martin(马丁)和R.L.M. Synge(辛格)，他们提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。 1952年，因为他们对分配色谱理论的贡献获诺贝尔化学奖。 二、色谱法的分类1、按两相状态分类 气相色谱:以气体为流动相 (GC) 液相色谱:以液体为流动相 (LC) 超临界流体色谱(SFC) 以超临界流体为流动相 2、按操作形式分类 柱色谱 3、按分离原理分类 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 凝胶色谱 色谱图是色谱输出数据。 三、色谱图及色谱常用术语 基本术语 （1）基线 （2）色谱峰的高度、宽度及面积 峰高 h 峰的最大值到峰底的距离 峰宽 有多种表达方法 用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法： （1）标准偏差(?)：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。 （2）半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =2.354 ? （3）峰底宽(Y)：Y=4 ? 峰面积 A ：色谱峰与峰底之间的面积， 可由积分仪求得。 (对称的色谱峰) A=1.065hY1/2 （不对称的色谱峰） （3）色谱保留值 是色谱分析中定性分析的依据 死时间（t0）：不与固定相作用的流动相（如空气）的保留时间； 保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间； 调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－t0 相对保留值r2,1 3、分配平衡（1）分配系数（ partion factor） K 分配系数 K 的讨论 (2).分配比 （partion radio）k’ 分配比与保留值的关系 第二节 色谱分析的基本理论 一、塔板理论-柱分离效能指标 2.有效塔板数和有效塔板高度 3.塔板理论的特点和不足 二、 速率理论-影响柱效的因素 A─涡流扩散项 B/u —分子扩散项(主要影响气相色谱) c ·u —传质阻力项 2.载气流速与柱效——最佳流速 3. 速率理论的要点 三、 分离度 讨论： 分离度的表达式： 讨论： 从色谱的流出曲线上可得到的信息 根据色谱峰的个数，可判断试样 中所含组分的最少个数。 根据保留值可做定性分析。 根据峰面积或峰高可做定量分析。 保留值及峰宽是评价色谱柱分离效能的依据。 两峰间距离，是评价固定相和流动相的选择是否合适的依据。 例题1： 例题2： 一、色谱定性鉴定方法 2.利用文献保留值定性 3.保留指数(Ⅰ) 保留指数计算方法 4.与其他分析仪器联用的定性方法 二、 色谱定量分析方法 2. 定量校正因子f 相对校正因子f ’i ：即组分的绝对校正因子与标准物质的绝对校正因子之比。 3.常用的几种定量方法 （1）归一化法： （2）外标法 （3）内标法 内标法特点 仪器分析测试技术网 /jpkc/yqfx/jxlx.htm 仪器分析网络课程 /wlkc/yifen/chapt11/11-1-1.html 清华大学仪器分析网络教程 /ex/tsingh