实验一氨基酸薄层层析范例.ppt

生物化学实验 氨 基 酸 薄 层 层 析 Thin Layer Chromatography Of Amino Acid 原 理 薄层层析由一平铺固定于玻璃板或塑料板的固定相及一由有机溶剂构成的流动相组成。样品点在固定相，由于样品中不同的成分被固定相吸附剂吸附的牢固程度不同及在有机溶剂中溶解性质不同，当有机溶剂因为毛细管作用沿吸附剂上升时，不同的成分而被分开。当与一标准物同时层析时，可鉴定未知样品中的不同成分。 操 作 制板 点样 展层 染色 Rf (Retention factor) 计算 1.点 样 实验室规则 １、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到、早退、缺席。每次实验都要穿白大褂、禁止穿拖鞋。 ２、爱护仪器，厉行节约。取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时盖好瓶盖，放回原处，切忌乱拿乱放、“张冠李戴”。 * * * * * 温州医学院生物化学教研室 毛孙忠 7A211 层 析 层析原理 待分离物质（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离物质各组分颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离物质中各组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离混合物的目的 。 层析概念 层析为实验室一类分离技术的总称。 层 析 分 类 按流动相 气相层析 液相层析 按固定相形状 柱层析 薄层层析 纸层析 层 析 分 类 类别 分离原理 基质或载体 吸附层析 化学、物理吸附 硅胶、氧化铝 、羟基磷酸 分配层析 两溶剂相中的溶解效应 纤维素、硅藻土 、硅胶 凝胶过滤 分子筛效应的排阻效应 琼脂糖、葡聚糖 离子交换层析 离子基团的交换反应 离子交换树脂 、纤维素、 葡聚糖 亲和层析 分离物与配体之间有 带配基的琼脂糖 特殊亲和力 或葡聚糖 2cm 铅笔划线 (小、均匀) 2.展 层: 30° ①30 ° ②板要端正 ③划线端朝上/下? 先吹干 3.染 色: 标记溶剂前沿 吹干 喷茚三酮 吹干 4.测量并计算Rf = AA斑点中心到底线距离 溶剂前沿到底线距离 Arginine Leucine Alanine Mixture 前 沿 三种氨基酸Rf的计算 3、注意安全、对于有毒、腐蚀的试剂更应注意，应避免其直接接触人体及衣物。 4、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，放水冲走。实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水槽。实验结束后应将实验台整理好。并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗。 一、层析技术 1、层析技术概念 2、层析技术分类 3、常用层析技术原理 色谱起源 色谱 组分 色素 石油醚 碳酸钙颗粒 用色彩（chroma）和图谱（graphs）组成色谱一词（Chromatography)，是1903年俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的 层析：是一种物理的分离方法，利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两相中，其中一相为固定相，另一相流过此相称作流动相，并使各组分以不同速度移动，从而达到分离的目的。 1、层析技术概念 2、层析技术分类 溶解度 液体 液体 纸层析 分配层析 名称 操作方式 固定相 流动相 分离依据 吸附层析 吸附薄层层析 气体吸附层析 固体 固体 液体 气体 吸附力 离子交换层析 离子交换柱层析 固体 液体 带电性 静电引力 凝胶层析 凝胶过滤 固体 液体 分子大小 亲合层析 酶与底物 抗原与抗体 固体 液体 配体专一性 （1）吸附层析 原理：当气体或液体中某组分的分子在运动中碰到一个固体表面时，分子会贴在固体表面上并停留一定时间然后才离开，此为吸附现象。 由此产生：吸附 脱离 再吸附 再脱离 的现象 吸附剂：硅胶、氧化铝、活性炭；纤维素、淀粉、聚酰胺；滑石、陶土、粘土。 3、常