实验三、饲料中粗蛋白的测定.ppt

实验三、饲料粗蛋白的测定 一、实验目的 1、通过饲料样品中粗蛋白质的测定，让学生了解凯氏定氮法测定的基本原理。 2、掌握半微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法。 3、掌握粗蛋白质含量的计算方法。 二、实验原理 各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉)的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO 2 ↑，H2O↑，SO 2↑状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（ 0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。 其主要化学反应如下： 1、2NH4（CH2）2COOH+13H2SO4→（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2（丙氨酸） 2、（NH4）2SO4 +2NaOH→2NH 3+3H2O+2Na2SO4 3、4H3BO3+ NH 3→NH4HB4O7+5H2O 4、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO3 本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺，铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。  1、实验室用研钵； 2、分析筛： 3、分析天平：感量0.0001g； 4、消煮炉或电炉； 5、滴定管：酸式，25或50ml； 6、凯式烧瓶：100或500m1； 7、凯氏蔗馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； 8、锥形瓶，150或250m1； 9、容量瓶：100ml。 四、实验内容 1、称取0.5-1g试样（含氮量5-80mg）准确至0.0002g，无损失地放入凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钾（或硫酸钠）15g，与试样混合均匀，再加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消煮炉士小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（360-410℃）直至溶液澄清后，再加热消化15min。 2、氨的蒸馏 （1）常量直接茂馏法 将上述的试样消煮液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。沿瓶壁小心加入40％氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连．蒸馏装置冷凝管的末端应浸入50ml硼酸吸收液lcm。加混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏，直至馏出液体积约150ml。先将吸收液取下，再停止加热。 （2）半微量水蒸汽蒸馏法 上述试样的消煮液冷却，加蒸馏水20m1转入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。取2％硼酸溶液20ml，加混合指示剂2滴，使半微量蕉馏装置的冷凝管末端浸入此溶液；蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色，否则应补加少许硫酸。准确移取试样分解液10～20ml注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml40％氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，并在入口处加水封密好，防止漏气，蒸馏4min，使冷凝管末端离开吸收液面，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。 3、滴定 用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol/L的HCI标准溶液滴定，仍以甲基红或混合甲基红为指示剂。 在测定饲料样本中含氮量的同时，应做一空白对照测定，即各种试剂的用量及操作步骤完全相同，但不加样本，这样可以校正因药品不纯所发生的误差，吸收氨后的吸收液立即用0.05mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。 4、空白测定 称取蔗糖0.0lg，以代替试样，按上述测定步骤进行空白测定，消耗0.05mol/L盐酸标准溶液的体积应不得超过0.3ml。 5、计算 每m1的lmol/L盐酸标准溶液相当于0.0140g的N。因此， 式中：v2—试样滴定时所需酸标准溶液的体积（m1）； v1—空白滴定时所需酸标准溶液的体积(m1)； c—盐酸标准溶液的浓度(mol/L)； m一试样的质量（g）； v?—试样的分解液总体积（ml）； v’—试样分解液蒸馏用体积（m1）； 0.0140—每ml HCl标准溶液相当于N的克数； 6.25一氮换算成蛋白质的平均系数。 每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋质含量在25％以。上，允许相对偏差为1％；当粗蛋白质含