微生物检验方法(2.0)2006-2-17.docVIP

目 录 一、微生物检验标准 二、总则 三、微生物检验操作指导 1．菌落总数测定 2．大肠菌群测定 3．嗜冷菌/低温菌测定 4．芽孢及耐热芽孢总数测定 5．霉菌和酵母菌计数 6．商业无菌 7．消毒洁净度及膜类微生物检测 8．空气微生物检测 9．大肠杆菌的测定 修订： 徐冬梅、张彩霞 审核：孙秀芝 审批： 李印所 日期： 2006年2月17日 一、微生物检验标准S 序号 检验 项目 方法名称 检验标准名称 检验标准号 伊利集团内部技术资料 《乳与乳制品微生物检验方法 芽孢和耐热芽孢的测定》 YLNB 3.6 / 5 霉菌、酵母菌计数 平板计数法 《 食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母计数》 GB/T4789.15 / 6 商业无菌 / 《》食（饮）具消毒卫生标准GB 14934 包括膜、包材涂抹 8 空气微生物检测 自然沉降法 《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》 GB/T18204.1 平皿放置时间15分钟 9 大肠杆菌 葡萄糖苷酶荧光方法 《出口食品中大肠杆菌检验方法》????? SN 0333-94 / 注：所引用标准未注明年号的执行最新有效版本 二、总 则S 执行GB/T 4789.1《食品卫生微生物学检验 总则》、GB/T4789.28《食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂》。 （一）样品的采集 1. 样品的采集必须遵循无菌操作程序。抽样工具如整套不锈钢勺子、镊子、剪刀等应当灭菌；容器须灭菌，且清洁、干燥、防漏、广口、大小适合盛放检样。 2. 抽样全过程中，应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。 3. 确定检验批，应注意产品的均质性和来源，确保检样的代表性。 4. 成品检样，对包装完整的样品进行采集；已开包的坏包样品须及时转移至无菌容器中，再进行微生物检测 。 5.常见的抽样方法有 5.1直接食用的小包装食品装或大容器包装的液体食品抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质；抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品装灭菌盛样容器的量，不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品摇匀如为非冷藏易腐食品，应迅速将所抽样品冷却至0-4℃。装或大容器包装的固体食品每份样品应用灭菌抽样器由几个不同部位采取，一起放入一个灭菌容器内注意不要使样品过度潮湿，以防食品中固有的细菌增殖。生产过程中的抽样划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性如用固定在贮液桶或流水作业线上的抽样龙头抽样时，应事先将龙头消毒样品的标记所有盛样容器必须有和样品一致的标记。在标记上应以及其他需要说明的情况。标记应牢固，具防水性，字迹不会被擦掉或脱色。当样品需要托运或由非专职抽样人员运送时，必须识样品容器。样品的保存和运送抽样结束后应尽快将样品送往实验室检验。如不能及时运送，冷却和易腐食品存放在0-4℃冰箱或冷却库内；其他食品可放在常温冷暗处。运送冷冻和易腐食品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂。保证途中样品不升温或不融化。必要时可于途中补加冷却剂或冷冻剂。如不能由专人携带送样时，也可托运。托运前必须将样品包装好，应能防破损，防冻结或防易腐和作好样品运送记录，写明运送条件、日期、到达地点及其他需要说明的情况，并由运送人签字。S （一）.菌落总数的测定 方法一：平板法 1.其他要求 1.1营养琼脂培养基：按GB/T4789.28 中规定或将购买制好的营养琼脂按说明制备、分装（不超过容积的3/4）于300ml三角瓶中，高压灭菌 （121℃、20分钟）。 1.2微生物实验用的各种加塞容器，如试管、稀释液瓶、培养基瓶、培养液管等，在高压灭菌前需加塞后再用双层报纸或牛皮纸包扎封口处，以防二次污染。 1.3实验过程打开过灭菌桶盖或包扎纸的剩余接种器材（如吸管、试管、平皿），不得留做下次使用，需重新灭菌后再使用。 1.4实验过程打开过包扎纸的剩余培养基（如琼脂培养基等），不得重新灭菌或留做下次再使用（建议将剩余营养琼脂倾倒成平板，备用）。 1.5稀释使用的9ml稀释液，用灭菌后三角瓶中的稀释液，使用时分装于试管中。 1.6制备225ml稀释液时，建议使用300ml的锥形瓶进行盛放，以便稀释后混匀充分。 1.7培养基准备：使用接受检查预先灭菌过的营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。 1.8环境监测 1.8.1超净台内环境的监测：每批实验时需要对照监测 方法：在无菌操作的条件下，取一个灭菌平皿倾入15mL营养琼脂培养基，待凝固后，在超净台中打开盖，暴露从操作开始至操作结束的整个过程（皿盖斜搭在皿底侧边上，以不遮盖皿底琼脂为宜），结束后合上盖，做好标记后进行同条件培养，作为超净台环境对照样