13应生张寿丽实验二光合色素的提取、理化性质、分离、吸收光谱及含量的测定案例.docVIP

专业：应用生物科学 班级：13应生 姓名：张寿丽 学号：134120258 实验二、光合色素的提取、理化性质、 分离、吸收光谱及含量的测定 实验目的： 1、掌握光合色素的提取方法以及了解有关的理化性质。 2、掌握光合色素的分离方法以及了解有关的吸收光谱。 3、掌握用分光光度计测定叶绿素含量的方法。 二、实验原理： 1、光合色素能溶于具有一定极性的有机溶剂，如丙酮、乙醇等。 2、提取液中无任何电子受体，因此可以观察荧光现象。 3、离体叶绿素在有氧气和光照条件下，发生光氧化作用，结构遭到破坏，形成加氧叶绿素等产物。 叶绿素是一种双羧酸酯，可以发生皂化反应。 叶绿素分子中Mg2+与仆啉环结合不稳定，可以被H+、Cu2+、Zn2+等离子所取代。 不同光合色素的分子量、分子结构、极性、溶解度、支持物对它们的吸附力等不同，因而分配系数不同，故彼此可以分开。 叶绿素的卟啉环结构对光有很强的吸收，主要是红光和蓝紫光。 8、混合液中的两个或多各组分，只要它们的光谱吸收峰不互相重叠，仍然可以根据Lambert-Beer定律（A = k L C）求出各组分含量。Lambert定律：A = k L；Beer定律A = k C。叶绿素a、b在80%丙酮溶液中的Amax分别为663nm、645nm，由此得出：见推导过程 Ca = 12.7 A663 – 2.69 A