实验6-血红蛋白凝胶柱层析(恢复)解读.ppt

血红蛋白凝胶柱层析 实验6 1.学习蛋白质大分子的分离纯化原理和方法 2.学习凝胶柱层析的操作技术 实验目的 实验原理 生物实验中经常对不同生物大分子进行分离纯化，以便对他们作进一步的研究。对生物大分子进行分离纯化的基本原理主要是利用它们之间各种理化性质的差异，如：利用分子表面荷电状态的不同发展成熟的电泳技术；根据不同分子对介质吸附性不同而建立的吸附层析，疏水层析等技术；利用生物大分子特异亲和的特性建立亲和层析技术及生物芯片检测技术。 凝胶层析是一种按分子大小分离物质的层析方法，广泛应用于蛋白质、核酸、多糖等生物大分子的分离纯化。该方法是把样品加到充满凝胶颗粒的层析柱中，然后用缓冲液洗脱。 凝胶层析所用的基质(凝胶)是具有立体网状结构、筛孔直径一致，且呈珠状颗粒的物质。这些物质可以完全或部分排阻某些大分子化合物于筛孔之外，而对某些小分化合物则不能排阻，让其在筛孔中自由扩散、渗透。大分子无法进入凝胶颗粒中的静止相，只能存在于凝胶颗粒之间的流动相中，因而以较快的速度首先流出层析柱，而小分子则能自由出入凝胶颗粒中，并很快在流动相和静止相之间形成动态平衡，因此就要较长的时间流经柱床，从而使不同大小的分子得以分离。 ?????????????????????????????????????????????????????????????????