上海海洋大学-现代生化分离技术-2016案例.docx

上海海洋大学试卷现代生化分离技术姓名：杨景丰 学号：M150103094 专业班名：生研三班列出并解释常用的生化分离技术（至少写出10种）（10分）。1.盐析法：当蛋白质溶液中逐渐加入中性盐时，会产生两种现象：低盐情况下，随中性盐离子强度的增高，蛋白质溶解度增大，称之为盐溶现象；但是，在高盐浓度时，蛋白质溶解度随之减少，发生了盐析现象。2.等电点沉淀:不同离子强度下，同种蛋白质的溶解度与PH相关。两性溶质在等电点及等电点附近仍有相当的溶解度，所以等电点沉淀往往不完全，加上生物分子的等电点比较接近，故很少单独使用等电点沉淀法作为主要的纯化手段，往往与盐析、有机溶剂沉淀等方法联合使用。3.有机沉淀法：向水溶液中加入一定量的亲水性的有机溶剂，降低溶质的溶解度，使其沉淀析出的分离纯化方法。4.溶剂萃取：溶剂萃取是溶质从一种溶剂中转移到另一种溶剂中的过程。它是利用溶质组分在两个互不混溶的液相中竞争性溶解和分配性质上的差异来进行的分离操作。5.离子交换法：离子交换法是使用离子交换剂作为吸附剂，将水溶液中的离子依靠静电引力吸附在吸附剂上，同时从吸附剂上置换出另一种离子，然后用适当的溶液将吸附物从吸附剂上置换下来，进行浓缩富集，从而达到分离的目的。6.色层分离：也称色谱分离或层析分离，已成为生物大分子分离和纯化技术中极其重要的组成部分。层析技术分离纯化的生物技术产品种类包括：干扰素、疫苗、抗凝血因子、生长激素、单克隆抗体、凝血因子等等。7.电泳分离法：带电粒子在电场中的迁移速率的不同是电泳分离的基础。电泳技术的基本原理都相同，但在实际应用中，由于研究对象及目的等的不同，电泳又可分为许多种类。例如按展开方式可分为:区带电泳、移界电泳、等速电泳、等电聚焦；按照是否使用支持物可分为：支持物电泳、无支持物电泳；按照操作方式可分为：一维电泳、二维电泳、交叉电泳、连续或不连续电泳。超声强化生化分离技术：将超声波的空化作用、热效应、机械作用应用于生化分离技术中, 可提高分离效率、缩短时间、简化操作过程。磁分离技术：具有分离效率高、分离速度快、占地面积小等优点。磁分离技术与絮凝技术、磁种洗选回收技术、生化技术的结合,是目前污水处理中磁分离技术的发展方向,它大大扩展了磁分离技术的处理对象和应用领域。?10.液膜分离技术：液膜通常由膜溶剂、表面活性剂、流动载体和膜增强添加剂组成 。膜溶剂是成膜的基体物质, 一般为水或有机溶剂, 选择的依据是液膜的稳定性和对溶质的溶解性。表面活性剂能明显降低液体的表面张力或两相的界面张力, 对液膜的稳定性、渗透速度、分离效率和膜的重复使用有直接影响。流动载体的作用是选择性迁移指定的溶质或离子, 常为某种萃取剂。总结生化产品的特点（10分）。答：生物技术产品有些是胞内产品，有些是胞外产物;?通常是由产物浓度很低的发酵液或培养液中提取的;?生物技术产品的稳定性差，易随时间变化，如易受空气氧化、微生物污染、蛋白质水解、自身水解等;?生物技术产品的生产多为分批操作，生物变异性大，各批发酵液或培养液不尽相同，且对最终产物要求质量高。总结植物组织中RNA的提取时的干扰物质及处理对策（20分）。1.酚类化合物的干扰及对策：防止酚类化合物被氧化或去除酚类化合物。2.多糖的干扰及对策：用低浓度乙醇沉淀多糖是一个去除多糖效果较好的方法。另一个常用的方法是醋酸钾沉淀多糖法。3.蛋白杂质的影响及对策：常规的方法是在冷冻的条件下研磨植物材料以抑制RNase 等的活性；;提取缓冲液中含有蛋白质变性剂, 如苯酚、胍、SDS 、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)等, 这样在匀浆时可以使蛋白质变性, 凝聚；有的方法是利用蛋白酶K 来降解蛋白杂质。进一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白质。4.次级代谢产物的影响及对策：。Baker 等 综合Hughes 等的选择性沉淀法、Chi rgw in的氯化铯梯度离心法和Iversen 等的RNA 回收方法纯化了松树种子、成熟松树针叶等植物组织的RNA 。四．写出分离过程中初级阶段、中间阶段和精制阶段对分离技术的要求（10分）。答：1）初始阶段，主要任务在于从相对较大体积的抽提液中除去大量杂质,同时能浓缩样品和保障样品处于稳定的环境中.侧重点放在速度和处理量上，方法有匀浆和沉淀，膜过滤等-离子交换或亲和层析等。2）中间阶段，主要任务是进一步除去大量杂质,但这些杂质与目的物的性质差异相对较小，所以选择分离方法要有较高的分辨率。侧重点放在分辨率和处理量上，进一步除杂，方法有离子交换，亲和，制备级等电聚焦。3）精制阶段，主要任务是除去微量杂质,使最后的产品获得高纯度.侧重点放在分辨率上。最后除杂，方法有得到高纯度离子交换，凝胶层析等。五．查阅至少10篇2016年生化分离技术方面主题的文献进行综述（主题自选，英文文献，附文献，大