生化检测实验案例.doc

生化检测实验讲义 实验一 粮食、油料检验-脂肪酸值测定法 实验目的 粮食在储藏过程中受到温度、水分和酶的影响，其脂类物质易发生水解和氧化反应。水解造成粮食游离脂肪酸含量增加，对粮食的种用品质和食用品质产生不良影响。粮食游离脂肪酸含量以脂肪酸值表示,即中和100g粮食试样中的游离脂肪酸值所需氢氧化钾的毫克数。通过脂肪酸值的测定，可以判断粮食品质的变化情况，推测储藏方法是否适当。 通过本实验要求掌握测定脂肪酸值的技术。 原理 浸出法。脂肪酸能溶于有机溶剂，利用苯来浸出脂肪酸，然后在酒精溶液中用标准KOH溶液中和脂肪酸，根据滴定时所消耗的碱液数量，就可求出脂肪酸值。 材料、仪器和试剂 1、材料 大米 2、仪器 带塞锥形瓶，量筒，移液管，微量滴定管，表面皿，天平，振荡器，漏斗 3、试剂 （1）、0.01N KOH（或NaOH）乙醇(95%)溶液 先配制约0.5N的KOH水溶液，再取20 ml,用95%乙醇稀释至500mL （2）、苯，95%乙醇 （3）、0.04%酚酞乙醇溶液 0.2g酚酞溶于500ml 95%乙醇溶液中。 四、操作方法 1、浸出 称取事先磨细的大米粉20±O.Olg于200ml或250ml锥形瓶中，加入50ml苯，加塞摇动几秒钟后，打开塞子放气，再盖紧瓶塞置振荡器振荡30min(或用手振荡45min)，取出，将瓶倾斜静置数分钟，使滤液澄清。 注：粉碎后样品如在20℃以上室温放置，脂肪酸值会很快增加，因此，必须及时进行测定。 2、过滤 用快速滤纸过滤，弃去最初几滴滤液后用量筒收集滤液25ml。 3、滴定 将25ml滤液移入锥形瓶中，再用原量筒取25m1 0.04%酚酞乙醇溶液加入锥形瓶中，立即用氢氧化钾乙醇溶液滴定至呈现微红色半分钟内不消失为止。记下所耗用氢氧化钾乙醇溶液毫升数V1。 4、空白试验 取25m1 0.04%酚酞乙醇溶液，用氢氧化钾乙醇溶液滴定，记下耗用氢氧化钾乙醇溶液毫升数V2。 五、结果计算 脂肪酸值以中和100g大米样品中游离脂肪酸所需氢氧化钾毫克数表示。 脂肪酸值=（V1-V2）×N×56.1×50/25×100/W（1-M） V1：滴定样品所用的氢氧化钾乙醇溶液体积，ml， V2：滴定25ml酚酞乙醇溶液所用氢氧化钾乙醇溶液的体积，ml, 50：浸泡样品用苯的体积，ml， 25：用于滴定的滤液体积，ml, N：氢氧化钾(或氢氧化钠)乙醇溶液的当量浓度， 56.1：氢氧化钾毫克当量， W：样品重量， M：样品水分百分率，% 100：换算为100g试样重量。 注:浸出液颜色过深，滴定终点不好观察时，改用四折滤纸，在滤纸锥头内放入约0.5g粉末活性碳，慢慢注入浸出液，边脱色边过滤。 六、思考题 1、粮食脂肪酸值测定的意义？ 实验二 邻甲苯胺法测定血糖浓度 一、实验目的 1、掌握邻甲苯胺血糖测定法的基本原理及操作方法。 2、了解邻甲苯胺血糖测定法的临床意义及应用。 二、原理 血浆样品中的葡萄糖在酸性环境中与邻甲苯胺共热时，葡萄糖脱水转化为5-羟甲基α-呋喃甲醛，后者与邻甲苯胺结合为蓝绿色的醛亚胺（Schiff硷）。血清中的蛋白质则溶解在冰醋酸和硼酸中不发生混浊。将标准葡萄糖溶液与样品按相同方法处理，在680nm波长处比色，即可测得样品中葡萄糖含量。 三、材料、仪器和试剂 1、实验材料：新鲜血浆 2、仪器 722型分光光度计，水浴锅，试管 3、试剂 邻甲苯胺试剂 称取硫脲2.5g，溶于冰醋酸750ml中。将此溶液转入1L容量瓶内，加邻甲苯胺150ml，2.4％硼酸溶液100ml,再加冰醋酸至1L刻度，置棕色瓶中，至少可应用2个月。 葡萄糖贮存标准液（100mg/ml） 将少量无水葡萄糖置于硫酸干燥器内一夜。精确称取此葡萄糖1.000g，以饱和苯甲酸溶液溶解并转移入100ml容量瓶内，再以饱和苯甲酸溶液稀释至100ml刻度。置冰箱中可长期保存。 葡萄糖标准液（1.5mg/ml） 在100ml容量瓶内，加入葡萄糖贮存标准液15.0ml，用饱和苯甲酸溶液稀释至100ml刻度，混和。 12mmol/L苯甲酸溶液 称取苯甲酸1.4g，加入蒸馏水900ml,加热助溶，冷却后加蒸馏水至1000ml。 四、实验操作 1、采得待测血样（抗凝）后立即离心以分离血浆（3,000转离心15分钟）。 2、取干燥试管3支，分别标出号码，按下表添加试剂。 邻甲苯胺法测血糖操作表 管别(ml) 测定管 标准管 空白管 血清（浆） 0.20ml ── ── 葡萄糖标准液 ── 0.20ml ── 蒸馏水 ── ── 0.20ml 邻甲苯胺试剂 6.0ml 6.0ml 6.0ml 3、混匀各管内容物置沸水浴中加热15分钟后取出用流水冷却。 4、以空白管校正零点，读取各管680nm处吸光度值。 五、结果计算 ? 六