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西安恒谦教育科技股份有限公司 （二）统计菌落数目 1、原理：样品足够稀释后接种在固体培养基上形成菌落，统计菌落数并换算出样品中的活菌数。 2、步骤：样品稀释—涂布平板—培养—菌落计数—样品活菌数换算。 《恒谦教育教学资源库》 教师备课、备考伴侣 专注中国基础教育资源建设 编辑发行：西安恒谦教育科技股份有限公司 全国统一客服电话：400-715-6688 《恒谦教育教学资源库》 教师备课、备考伴侣 专注中国基础教育资源建设 了解 实验设计中对照实验的设置方法 理解 筛选微生物的原理、选择培养基的配制及其对微生物的选择作用 1.对土样的选取和选择培养基的配制 2.对分解尿素的细菌的计数 一、研究思路 （ 一）、菌株筛选 1．自然界中目的菌株的筛选 (1)依据：根据它对 的要求，到相应环境中去寻找。 (2)实例：PCR技术中用到的耐高温的Taq细菌就是从 中筛选出来的。 生存环境 热泉 2．实验室中目的菌株的筛选 人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 其他微生物的生长。 3．选择培养基 在微生物学中，将允许 生长，同时 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 目的菌株 抑制或阻止 特定种类微生物 抑制 或阻止 3、常用方法： 法。 4、统计依据：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌。 5、计数时选择的平板菌落数一般应在 ，计数公式为 。 稀释涂布平板 稀释度 活菌 30～300 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M （三）．设置对照 (1)对照实验：是指除了 以外，其他条件都相同的实验。 (2)主要目的：排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验的可信度。例如为了确认培养基是否被杂菌污染，需以 培养基培养作为空白对照。 被测试因素 非测试因素 牛肉膏蛋白胨 二、实验设计及操作 1．实验设计（实施步骤：土壤取样 培养基配制 样品稀释 涂布平板 培养与观察 细菌的计数 ） (1)土壤取样： ①取样条件：富含 的土壤表层，酸碱度接近 且潮湿。②取样部位：距地表约 cm的土壤层。 （2）制备培养基：分别配制选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基（后者作对照用） (3)样品稀释和涂布： 样品的稀释程度直接影响平板上生长的 ，选用一定稀释范围的样品液进行培养（即将样品进行不同倍数的稀释，并分别接种培养），从而保证形成菌落数在 之间的平板，便于计数。 有机质 中性 3～8 菌落数目 30～300 (4)微生物的培养与观察(以细菌为例)： 将培养基平板置于 温室中培养1～2 d，每隔24 h统计一次 数目，最后选取数目 时的记录作为结果。 (5)细菌的计数： 当菌落数目稳定时，取同一 下的3个平板进行计数，求出 ，并根据所对应的 计算出样品中细菌的数目。计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V)×M 30～37℃ 稳定 菌落 稀释度 平均值 稀释倍数 2．操作提示 (1)无菌操作： ①取土样的用具在使用前都需要 。 ②应在