L异亮氨酸发酵过程的代谢分析.pdfVIP

发酵工程研究会 第十九次年会衣扣#事 L．异亮氨酸发酵过程的代谢分析 杨宁1 陈宁 (天津科技大学生物工程学院，天津300222) 摘要本文使用代谢工程的方法，对黄色短杆菌合成L．异亮氨酸的生物过程，进行 了代谢途径分析和代谢流分析。文章研究了L．异亮氨酸在5L罐发酵过程中后期的 代谢流分布，结合途径分析提出了黄色短杆菌由葡萄糖合成L．异亮氨酸的最优途 径，并计算出L．异亮氨酸取得最大理论转化率时的代谢流分布，研究成果对发酵法 生产【广异亮氨酸有重大指导意义。 关键词L_异亮氨酸代谢工程黄色短杆菌代谢分析 L．异亮氨酸是人体八种必需氨基酸之一，同时又是三种分支链氨基酸之一，因 其特殊的结构，能治疗神经障碍、食欲减退和贫血。在人类生命代谢中占有特别重 要的地位，是合成蛋白质的素材，也可以作为生物体的能源，作为生物体成分的前 体。但由于目前L．异亮氨酸价格昂贵，因此主要用于配制复合氨基酸制剂，特别应 用于高支链氨基酸输液(如3H输液等)及口服液(肝安干糖浆等)。如何提高异亮氨 酸产量、降低生产成本是目前一个重要课题。 近年来，代谢工程研究方兴未艾，为人们提供了新的研究方法：通过代谢工程 方法改变细胞内部的代谢流分布，使其在一定环境下生成更多的产物。代谢流分析 (MFA)和途径分析(PA)是代谢工程中用以指导遗传操作的理论基础，是代i9j．网络 分析的基本方法。MFA围绕胞内代谢反应，使用物料衡算方法，对所有主要的胞内 反应建立一个基于化学计量的代谢流平衡模型(MFB)，并利用该模型计算不同途径 的代谢流分布；PA使用关于计量学模型和可逆性或非可逆性反应的知识，通过计算 机程序计算得到最优途径的通量分布，然后按照最优途径进行微生物遗传改造和发 酵条件优化，验证其他代谢途径对代谢网络通量分布的影响，计算最大理论转化率。 MFA和PA对于代谢工程的遗传改造工作和发酵控制具有很大的指导意义。 1材料和方法 1．1供试菌株 黄色短杆菌Brevibacterium Jlavum 1作者简介：杨宁(1982一)，男(汉)，河北省石家庄市人，硕士研究生，主要研究方向为代谢控制发酵． 学代谢控制发酵研究室保藏菌种。 1．2培养基(g／L) 7．0～7．2。 斜面培养基：葡萄糖1，酵母膏5，蛋白胨10，氯化钠2．5琼脂20，pH 种子培养基：葡萄糖30，KH2P04 0．4，FeS04 1．5，MgS04 0．01，MnS040．01， 3，·尿素2，豆饼水解液20，VH 7．0-7．2。 (NH4)2S04 O．5mg／L,VBI2．5mg／L，pH 15 发酵培养基：葡萄糖70，(NH4)2S0412．5，FeS04 500mg／L，MnS04 mg，MgS04 1．5，K2HP043，VH 20 15mg／L，KH2P04 1401ag／L，Val0．1mg／L，Metmg／L，豆饼水解液20， 玉米浆25，pH7．0~7．2。 1．3培养方法‘ 种子培养：接一环生长良好的斜面种子至装有25m1种子培养基的500ml摇瓶中， 置于旋转式摇床上(200r／rain)，31℃振荡培养38h。 发酵：按15％接种量将种子液接入5L自动控制发酵罐中，装液量3L，通风量 1-3L／min，根据溶氧控制搅拌转速，培养温度31℃，通过自动流加浓氨水溶液控制 pH7．2+0．03，流加80％葡萄糖控制残糖2％吗％，发酵96h。