冷冻干燥或交联制胰岛素-壳聚糖纳米颗粒的设计,表征和生物效率(译文)讲解.docxVIP

冷冻干燥或交联制胰岛素-壳聚糖纳米颗粒的设计，表征和生物效率 M. Diopa, N. Aubervalb, A. Viciglioa, A. Langloisa, W. Bietigera, C. Muraa, C. Peroneta, A. Bekelb, D. Julien Davidc, M. Zhaoc, M. Pingeta, N. Jeandidiera, C. Vauthierd, E. Marchionic, Y. Frereb, S. Sigrista,* 摘要: 胰岛素口服给药是理想的给药方式，但是由于胃肠道的苛刻条件没有效果。使用封装在自组装颗粒中的胰岛素的保护是有希望的方法。然而，这种颗粒在生物环境中的稳定性缺乏导致口服给药后封装的胰岛素的生物利用度低。这项研究的目的是评价冷冻干燥和交联两种稳定策略的单独或联合作用，对胰岛素负载的壳聚糖纳米粒的影响，并确定其体外和体内的生物有效性。通过胰岛素和壳聚糖之间的复合凝聚制备纳米粒，通过与三聚磷酸钠溶液（TPP）交联或冷冻-干燥或两种方法同时处理而稳定。体外纳米颗粒吸收的生物有效性通过流式细胞仪对上皮模型（Caco-2 / RevHT29MTX（粘液分泌细胞））评估。在体内，纳米颗粒通过导管注射在对胰岛素缺乏的大鼠的腹膜或十二指肠。与不影响纳米颗粒电荷但降低纳米颗粒尺寸（-25％）的交联相比，冻干在尺寸和电荷上增加（+15％ vs control 412±7nm; + 36±0.3mV）。当两种方法组合时，与标准水平相比，连续处理降低纳米颗粒大小并增加电荷。没有冷冻干燥的，其中60％的纳米颗粒在2小时后被破坏，与没有冷冻干燥的相比，冷冻干燥是必需的，用以防止纳米颗粒在肠环境中的破坏。另外冷冻干燥结合交联处理时提高了纳米颗粒的生物效率，当存在粘液时细胞中的摄取增加。在体内两种处理的组合显示了其对胰岛素的保护，当施用纳米颗粒时具有降低血糖的作用。这项工作表明，冷冻干燥和交联处理的组合是必要的，以在体外和体内胰岛素的递送中稳定（冷冻干燥）和增加自组装纳米颗粒的生物效率（交联）。 关键词：壳聚糖 胰岛素 纳米颗粒 口服 复合凝聚 1.介绍 皮下胰岛素注射广泛用于糖尿病治疗。然而，注射通常是痛苦的，导致患者依从性低（Al-Tabakha and Arida,2008）。通过最大限度地减少注射，可以增加患者依从性，从而提高治疗疗效。口服给药是递送药物方便舒适的方法，因为其消除了与注射相关的疼痛和创伤。 然而，由于胃肠道的恶劣条件，口服给药会使胰岛素在到达血流之前使蛋白质变性。例如，小于0.1％的口服胰岛素可以完好的地到达血流（Foss and Peppas,2004）。此外，低pH和蛋白酶介导的水解限制了完整胰岛素的肠吸收（Aoki et al.,2005）和转运到体循环中。因此，为了开发有效的口服糖尿病治疗剂，保护胰岛素抵抗胃肠环境是必要的。已经开发了改善胰岛素摄取的方法，包括吸收促进剂，化学修饰和纳米胶囊或纳米球中的包封。聚合物胶体系统在治疗性蛋白质的口服递送中表现出一定程度的成功。 正在进行许多研究以改善使用递送系统的生物活性大分子的口服生物利用度。由天然聚合物，例如壳聚糖配制的纳米颗粒（NPs）作为蛋白质的载体是有利益的（Sarmento et al.,2007）。壳聚糖对于纳米颗粒开发具有许多优点，包括生物相容性，生物降解性，低免疫原性和毒性（Agnihotri et al., 2004；Pandey et al., 2005）。壳聚糖的粘膜粘附性质与其高正电荷密度有关（Plapied et al.,2010）。因此，壳聚糖是药物递送到粘膜组织的理想物质（Sayin et al., 2009）。壳聚糖主链上的许多游离胺基团产生有利的性质，允许在药物递送应用中广泛使用。在酸性环境中，纳米颗粒自发形成，由于带正电荷和带负电荷的物质之间的分子内和分子间连接（Veis,2011），其形成聚电解质复合物（复合凝聚）。这个过程基于自组装的壳聚糖和胰岛素纳米颗粒，似乎有希望在不使用苛刻的有机化学品的情况下制备纳米颗粒。通过离子对和静电相互作用形成的纳米颗粒保留聚合物完整性。包括胰岛素在内的蛋白质的胃肠摄取可以通过包裹在纳米颗粒中来改善，纳米颗粒保护胰岛素免于降解。这些载体具有改善的口服肽递送，这是由于它们在胃肠道中的长期保留和由游离氨基介导的对粘液层的良好渗透（Renukuntla et al.,2013）。正电荷可以与许多带负电荷的表面反应，包括细胞膜，粘液衬里中的唾液酸和阴离子聚合物。这些颗粒系统还对带负电荷的大分子（Mohammadpourdounighi et al.,2010）显示高亲和力，例如粘膜表面上的粘蛋白。此外，它们被肠细胞吸收，肠吸收是主要的吸收