金龙胆草查尔酮合酶基因_CHS__省略_隆及其在花期不同组织的表达量_刘姗概述.pdfVIP

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(6): 703~711 DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2014.06.005 金龙胆草查尔酮合酶基因(CHS) 的克隆及其在花期不同组织的表达量 分析 1，2 ，3 1 1 1 1 1* 1 刘姗 孙蓉 唐自钟 郑天润 高静雷 陈惠 李成磊 1 四川农业大学生命科学与理学院，雅安625014；2 攀枝花学院生物与化学工程学院，攀枝花617000；3 干热河谷特色生物资源研发四川 省高校重点实验室，攀枝花617000 *通讯作者，chen62hui@ 摘 要 查尔酮合酶(chalcone synthase, CHS)是植物类黄酮化合物合成的第一关键酶。为了获得金龙胆 草(Conyza blinii Lévl.)CHS 基因，本研究采用快速扩增cDNA 末端(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)技术克隆得到了金龙胆草CHS 基因的DNA 和cDNA 全长序列，并进行生物信息学分析，通过RT- PCR 检测该基因在花期不同组织部位中的表达情况并检测对应部位的相对花青素含量。结果表明，获得 的CHS 基因DNA 全长2 098 bp ，包括2 个内含子；cDNA 全长为1 692 bp，含有完整开放阅读框(1 197 bp)， 编码399 个氨基酸，包含查尔酮合酶的标志性序列，命名为CbCHS(GenBank 登录号: KJ155749)。序列比 对结果显示，金龙胆草CbCHS 基因与已报道的其它植物的CHS 氨基酸序列具有很高相似性(最高为 95%) 。半定量RT-PCR 结果显示，在叶和茎的表达量最高，相对表达量分别达到87.03 %和98.33 %，表达 量之间没有显著差异(P ＞0.05) ；在根中CbCHS 基因表达量最少，相对表达量仅为9.43 % ，表达量与其余 部位具有显著差异(P ＜0.05) 。花青素含量也以茎和叶中最高，根中微量，表明CbCHS 基因与花青素的蓄 积有一定相关性。本研究首次克隆了金龙胆草CbCHS 基因的全长DNA 及cDNA 序列，研究了其在花期 不同组织器官中的表达量差异及与花青素的含量关系，为进一步研究CbCHS 基因对金龙胆草黄酮含量 的影响及其调控机制提供了基础资料。 关键词 金龙胆草，查尔酮合酶(CHS)，克隆，生物信息学分析，表达量分析 Cloning of Chalcone Synthase Gene (CHS) from Conyza blinii Lévl. and Its Expression Analysis in Different Tissues During Florescence LIU Shan1,2,3 SUN Rong1 TANG Zi-Zhong1 ZHENG Tian-Run1 GAO Jing-Lei1 CHEN Hui1* LI Cheng-Lei1 1 College of Biology and Science, Sichuan Agricultural University, Yaan 625014, China; 2 Department of Biological and Chemical Engineering, Panzhihua University, Panzhihua 617000, China; 3 Key Laboratory of Dry-hot Valley Characteristic Bio-resources Development at University of Sichuan Province, Panzhihua 617000, China * Corresponding author, chen62hui@ Abstract Chalcone synthase (CHS) is a pivot for the biosynthesis of flav