云芝糖肽PSP中糖肽结合的色谱法鉴别.pdf

306 菌物学报 24卷 云芝糖肽(PSP)中糖肽结合的色谱法鉴别 杨晓彤 糜可 冯慧琴 杨庆尧+ (上海师范大学微生物与免疫学研究所上海200234) 擒要：云芝糖肽PSP经凝胶渗透HPLC(HP-GPC)或DEAE阴离子交换层析分离，示差检测器(彤)和紫外检测 器(Uv)检测多糖和蛋白质峰．酚硫酸法和Lowry-Folin法测定洗脱液中糖和肽含量。结果发现无论经凝胶渗透 色谱或离子交换色谱分离后．云芝糖肽中糖和肽峰必定相重合，显示糖和肽的紧密结合。对照云芝多糖中的多 糖和蛋白质则分别出现在不同位置，显示糖肽分离，为混合物。 关奠词：云芝糖肽PSP。鉴定，凝胶渗透色谱。离子交换 ofConidusvea尉co]or,简称PSP)是国家二类新药，用于肿瘤病人拮抗 云芝糖肽(Polysaccharopeptide ve,,尉balw)Cov—l菌株的深层发酵菌丝体中提取的一种多糖和 2005)。PSP的化学成分是从云芝(Con汤lus 肽的复合分子(Yang，1993)，多糖与蛋白质比例约为2：l，多糖以葡萄糖为主并由多种单糖组成(Yans＆ Zhou，1993)，仅含有少量糖醛酸(冯慧琴，2005)，也未检测到硫酸基团。PSP的特点使得它与以蛋白质为主 的糖蛋白(glyeoprotein)和含有硫酸基、或由糖醛酸一乙酰氨基己糖二糖结构重复组成的蛋白聚糖 bound ATCC真菌学家钟顺昌博士的建议，从“proteinpolysaccharide”创建而成，意在突出其不同。但云芝 糖肽、糖蛋白和蛋白聚糖均有多糖和蛋白质(肽)部分是共价紧密相连的共同特点。这一特点。使PSP与 云芝予实体多糖或菌丝体胞外多糖中存在非结合蛋白质，肽的混合体系区分开来。 对糖肽结合的鉴别．可为区分糖一肽结合物和糖一肽混合物提供重要依据。PSP中糖肽联结已用电泳、 薄层色谱等多种方法得到验证(Yang＆Zhuang，1993)，本文尝试用凝胶色谱和DEAE阴离子交换色谱作 进一步鉴别。并与云芝子实体多糖进行了对照比较。 1材料方法 1．1材料：云芝糖肽PSP由上海新康药厂提供。云芝多糖购自香港市场。 1．2仪器：Geld HPLC色谱仪为Beckman公司产品，Gilsonm一132示差检测器。偈K—Gel一 System ProteinPakDEAE 4000SW凝胶色谱柱(7．5x300mm)或Waters5一PW阴离子交换柱(SxTSmm)。 1．3多糖和蛋白质含量分别用酚硫酸法及Lowry法测定(杨晓彤，2000)。 1．4凝胶色谱法(HP—GPC)鉴定：云芝糖肽或云芝多糖溶于磷酸缓冲液流动相后，注入髂K—Gel一 4000SWHPLC柱中，用相同流动相洗脱，洗脱液用m和UV检测器检测并在分部收集后用酚硫酸法和 Lowry法分别测糖和蛋白质。 1．5 DEAE阴离子交换色谱法鉴定：云芝糖肽或云芝多糖溶于磷酸缓冲液流动相，注入DEAE5一PW HPLE柱中，用1个柱体积的相同流动相洗脱，然后换用含lmollLNaEl的磷酸缓冲液进行梯度洗脱，被 柱吸附的组分在分部收集后用酚硫酸法和Lowry法分别测糖和蛋白质。 2结果与讨论 鉴别产品中有无糖和肽，可用检测糖和肽的试剂鉴定，如常用蒽酮或酚硫酸试剂检测糖，呈绿色或 橙色者为阳性；用Lowry—Folin或茚三酮试剂鉴别肽，呈兰色或紫色者为阳性。凡产品对糖和肽试剂均呈 阳性者，提示该产品既含糖又含肽。但产品中同时含糖和肽，并不表示糖肽一定是紧密联结的复合物，可 能是混合物。糖和肽的分子量可能不同，带有的电荷可能也有差异。如果糖肽两部分是混合的。经过凝胶 层析或离子交换分离后。糖和肽不同的性质会使它们各自的色谱峰出现在不同位置。但如果糖肽两部分 是紧密联结成一体的，糖和肽的色谱峰则一定重叠。据此，我们用凝胶色谱和阴离子交换色谱对云芝糖 肽和云芝多糖中糖肽结合状态进行了分析鉴别。 +通讯作者。地址：上海市桂林路100号14号楼8楼。邮编：200234。Email：psp@shnu．edu．cn