亚洲玉米螟不同地理种群的RAPDPCR分析.pdfVIP

320 科技创新与绿色植保 亚洲玉米螟不同地理种群的RAPD—PCR分析‘ 刘 宁 文丽萍”王振营何康来 白树雄 (中国农业科学院植物保护研究所，北京100094) 摘要：为明确我国亚洲玉米螟不同地理种群的遗传结构，本实验利用RAPD分子标记技 术和PCR扩增对国内不同玉米种植区的13个亚洲玉米螟地理种群进行遗传差异分析．获得种 群间的遗传距离和亲缘关系聚类图。结果表明种群间的遗传差异和地理位置存在一定的相关 性，13个种群可划分为4大支，这为亚洲玉米螟区域性大发生原因分析提供理论依据。 关键词：亚洲玉米螟；不同地理种群；RAPD—PCR分析 国内对亚洲玉米螟不同地理种群遗传结构的研究报道较少，Wang等…对我国9个地 区的玉米螟进行了同功酶的研究，认为9个种群可能来自于同一等位基因的变异，这种差 异还不能将新疆伊宁种群和其他种群相区分。孙姗等心】应用RAPD方法分析了我国6个地 区的玉米螟种群，对原来认为新疆伊宁为欧洲玉米螟的观点提出了质疑。鲁新等口]对吉 林省亚洲玉米螟的一、二化性进行了RAPD分析。本实验利用RAPD分子标记技术对我国 不同玉米种植区的13个亚洲玉米螟地理种群进行遗传差异的分析，为明确亚洲玉米螟区 域性大发生提供理论依据。 ● 1材料和方法 1．1 测试虫源 野外采集的不同玉米种植区的13个亚洲玉米螟种群，解除滞育，化蛹羽化后，分别 选取未交尾雄蛾8—10头于液氮中冷冻保存备用，不同地理种群的样品被标记以不同的编 码(表1)。 1．2试剂和仪器 电泳结果用EagleEye11紫外扫描成像系统(美国Stralagene公司)观察记录。 1．3基因组DNA的提取 参考徐广M1的方法利用酚一氯仿抽提法提取亚洲玉米螟成虫的总DNA。 1．4 PCR反应体系和反应程序 buffer 1．503，10X2．5一，Taq酶(2u／03)0．503，ddH：0至2503。 ·．基金项目：植物病虫害生物学国家重点实验室开放基金和“国家十五科技攻关项目”(2001BAS09801) 作者简介：刘宁。女。硕士。主要从事亚洲玉米螟生态适应研究。 ¨通信作者：E—mail：Lpwen@ippe咖．cn 研究论文 321 玉米种植区 采集地点 编码 发生世代 经度(E)纬度(N) 采集时间 表2特异性扩增的随机引物序列和编号 ※S为Sangon公司编号，oP为OPERON公司编号。 1．5 电泳检测，观察，拍照 取8出扩增产物在含有0．04％EB的1．4％的琼脂糖凝胶上电泳，标准分子量为 kDNA／HindlII+EcoRI EYE 成像系统EAGLEII(Mitsubishi)上观察结果。 1．6数据处理 根据多态性扩增的琼脂糖电泳图谱，比较同一引物在不同样品间扩增条带的数目、带 出现的位置及强弱，对多态位点进行0、1统计(无带记作0，有带记作1)，计算Nei氏 相似性系数S[51和遗传距离D(D=1一S)。采用SAS(statisticalanalysis system)软件包类 平均法(UPGMA)进行聚类分析。 322 科技创新与绿色植保 2结果与分析 2．1 亚洲玉米螟的基因组DNA 提取13个地区的亚洲玉米螟的基因组DNA，经电泳检测，条带完整，可用于RAPD 分析，电泳图谱见图l。 图1 13个地区的亚洲玉米螟基因组DNA 2．2 RAPD产物的多态性 通过筛选获得的17条随机引物对13个不同地理种群的亚洲玉米螟具有稳定的多态性 76．84％，平均每个引物的扩增条带数为5．8条。 表3 17个随机引物扩增的多态性条带 2．3不同地理种群亚洲玉米螟的类平均聚类分析 选择具有重复性好的条带进行统计分析，获得不