井冈羟胺A+3脱氢酶的分离纯化及其酶特性的研究.pdfVIP

K057 井冈羟胺A 3-脱氢酶的分离纯化及其酶特性的研究 张建芬 郑裕国 沈寅初 （浙江工业大学生物工程研究所，浙江杭州 310014 ） 摘 要 本实验室分离得到的假单胞菌的静息细胞能催化裂解井冈羟胺 A 为井冈胺，得到井冈 胺的含量为2.503mg/ml 。粗酶液经热变性去杂蛋白后，上DEAE Sephadex A 50 柱并用聚乙二醇 （PEG ）20 ，000 浓缩。得到了纯化倍数达到了近30 倍的井冈羟胺A 3-脱氢酶。该井冈羟胺A 3- 脱氢酶能以六氰铁酸钾作为电子受体。井冈羟胺A 3-脱氢酶酶反应的最适温度为25 ℃，最适pH 为8.5，该酶对热比较稳定。 关键词 井冈羟胺A 3-脱氢酶 井冈胺 六氰铁酸钾 PURIFICATION AND CHARACTERISTIC OF VALIDOXYLAMINE A C-N DEHYDROGENASE ZHANG Jianfen and ZHENG Yuguo (Institute of Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014, China) Abstract Validamycin A could be biocatalytic by resting cell of Pseudomonas sp, and valienamine was got 2.503mg/ml. Through heat treating, DEAE Sephadex A 50 ion exchange and concentrated by PEG 20,000, the purification fold of validoxylamine A C-N dehydrogenase was about 30.It could use ferricyanide as electric acceptor. The optimum temperature was 25℃， optimum pH was 8.5.The dehydrogenase was more stability to heat. Keywords validoxylamine A C-N, dehydrogenase, valienamine, ferricyanide 引 言 在酸解或者β-糖苷酶的作用下，井冈霉素A （Validamycin A ）能水解脱去葡萄糖，生成 井冈羟胺A （validoxylamine A ）。而井冈羟胺A 在微生物酶解的条件下，C—N 键会断开， 形成井冈胺（Valienamine ）。参与井冈羟胺A 裂解的酶有两种：井冈羟胺 A 3-脱氢酶和 3- 酮井冈羟胺A C-N 裂解酶，它们都属于胞内酶。即井冈羟胺A 首先在脱氢酶的作用下，氧 [1] 化生成3-酮井冈羟胺A ，然后，在裂解酶的作用下，生成井冈胺 。 基金项目：国家自然科学基金项目（NO）和浙江省自然科学基金重大项目（N0.ZB0106 ）资助。 作者简介：张建芬（1979），女，硕士。通讯联系人：郑裕国，男，教授， Email: zhengyg@zjut.edu.cn 制剂类降糖药均含有井冈胺的相同结构，如阿卡波糖（Acarbose ，拜糖平）为一假性四糖， 核心结构为井冈胺，伏格列波糖（Voligase ，倍欣）的核心结构为井冈醇胺，可由井冈 胺合井冈胺(valienamine)是一种环醇类物质，与D-葡萄糖的结构类似。日本已有研究表明 井冈胺对α—淀粉酶、糖化酶、麦芽糖酶、蔗糖酶等水解酶有很强的抑制作用[2] ，因此井冈 胺是重要的糖苷酶抑制剂，可利用其来生产有效的降糖药和减肥药。一些效果较好的糖苷酶 抑成。这些降糖药可以井冈胺作为先导化合物来进行化学合成。因此井冈胺是合成其它新糖 苷酶抑制剂类降糖药的重要医药中间体。 本文主要就井冈羟胺A 3-脱氢酶的分离纯化及其酶特性作了一些研究。 1 材料与方法 1.1 材料 Sephadex G 100、DEAE Sep