井冈霉素系列化合物对白蚁海藻糖酶抑制性的研究.pdfVIP

发酵工程学科的进展 ——第四次全国发酵工程学术讨论会论文集 井冈霉素系列化合物对白蚁海藻糖酶抑制性的研究 张烽，金利群， 郑裕国’ (浙江工业大学生物工程研究所，浙江杭州 310014) 摘要：论文通过井冈霉素系列化合物井冈霉素A、B，井冈霉亚基胺A、B的制备和白蚁海 藻糖酶的初步分离纯亿，考察了井冈霉素系列化合物对白蚁海藻糖酶的抑制作用．实验结 511ftmol／mL。 关键词：井冈霉素；井冈霉亚基胺；海藻糖酶；抑制性 3．2．1．28，a，o-trehalose 海藻糖酶(EC 海藻糖成两分子葡萄糖而被利用。目前海藻糖酶作为一种专一地水解海藻糖生成葡萄 糖的酶，已经成为新型、高效杀虫剂的一个标靶n]。通过对不同昆虫和真菌体内海藻糖 酶的抑制作用的研究，近年来已经发现了多种具有强烈抑制作用的海藻糖酶抑制剂，如 海藻糖的结构相似，且国外已经有对井冈霉素A和亚基胺A的研究[3]，但是对井冈霉素 B和亚基胺B的研究还很少，且对白蚁海藻糖酶及其抑制剂的研究还是相当少，所以本 文以此为出发点，来研究井冈霉素系列化合物对海藻糖酶的抑制作用，为开发成新型的 生物农药提供研究基础。 R20 H 图1 井冈霉素系列化合物和海藻糖的结构 1 材料与方法 1．1材料 井冈霉素粗样品由钱江生化提供，纯的井冈霉素A、B和井冈霉亚基胺A、B样品由 *通讯作者：Tel：0571-E--mail=zhengyg(孕,．jut．edu．crl 656 第四次全国发酵工程学术讨论会 本实验室分离。白蚁由杭州萧山白蚁防治所提供，其他试剂为市售的化学纯或分析纯。 1．2 井冈霉素A、B和井冈霉亚基胺A、B的制备 收集，经HPLC法检测后冻干得到井冈霉素A和B样品。以井冈霉素为原料，通过硫酸 水解除去葡萄糖来制备井冈霉亚基胺“]。先用CaC03中和酸解液中的S02一，抽滤收集 上清液，用强酸性阳离子交换树脂001×7纯化井冈霉亚基胺，再用层析树脂Dowexl×2 进一步纯化井冈霉亚基胺A和B，检测后冻干得到样品。 1．3白蚁海藻糖酶活性测定． 取酶液0．3ml，加入pH3．3的磷酸氢二钠一柠檬酸标准缓冲液0．9ml，2％海藻糖标 等嗍酶一DNS比色法测定海藻糖含量。将上述条件下每分钟生成l#mol葡萄糖所需的 酶量定义为1个酶活力单位(U)，比活力为每毫克蛋白质所包含的酶活力单位(U／mg)。 1．4酶的分离纯化 在4℃下，将冰冻的白蚁超声波破碎后离心取上清液。粗酶液中加入硫酸铵盐析，收集 20％60％饱和度的沉淀部分。用少量pH为3．3的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液溶解沉淀透 析。透析过夜后上HighQ强碱性阴离子交换柱进行梯度洗脱，收集活性部分浓缩备用。 2 结果与分析 2．1 井冈霉素A、B和并冈霉亚基胺A、B的分离纯化 井冈霉素经层析分离得洗脱曲线如图2，流速2mL／min。井冈霉素的酸解液经001 x7树脂离子交换后，再上层析柱，得洗脱曲线见图3，流速1．8mL／min。由层析谱图可 以看出分离效果比较好。 6 5 4 3 2 ^—叫，∞m)越髭求囊 l O 0 500100015002000250030003500 洗脱体积(mL) 洗脱体积(mL)