肉桂地链霉菌的发酵工艺优化.pptVIP

调控基因MonＨ（正调控基因）出现双交换的个体，待提基因组验证（？）。 在斜面培养基上，MonBⅡ与调控基因MonRⅠ、MonRⅡ均出现恢复到野生型的个体，继续采用液体液体培养基对其进行传代。 ST021全基因敲除 同样采用λ-Red重组系统进行全基因敲除，在ST021的阅读框外分别选取未知功能域处长度为3211bp、3196bp作为上、下游同源臂。 将Apr片段置换到上、下游同源臂之间，待酶切验证。 将林春燕构建好的带有部分埃博霉素基因簇的游离型质粒Cos002、整合型质粒Cos004进行结合转移转入到ST021。目前Cos002长出转化子，待验证。 将ST021原始菌株，进行单交换菌株 RⅠ分别涂在Kan浓度为100ug/ml 、120ug/ml、150ug/ml、180ug/ml、300ug/ml、500ug/ml的斜面培养基上,分别看其所对应的抗性浓度。 继续对 RⅠ、 RⅡ、 H进行液体传代，每两天传代一次，然后吸取5ml菌丝体，用无菌水洗3次，涂在Apr的斜面培养基上。7天后在Apr板子上挑单菌落继续涂在含Apr的培养基上。 全基因敲除 将长出来验证过的转化子进行松弛培养，在固体培养基传代第一代，液体传达第二代。其余的转化子在Apr和Nali的高氏培养基上验证。 * * *