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第一步:获取目的基因 目的基因有哪几种? 编码蛋白质的结构基因 具有调控作用的因子 怎么样获取目的基因? 从自然界已有的物种中分离出来 用人工的方法合成 第一步:获取目的基因 第一步:获取目的基因 基因文库的构建模式图 第一步:获取目的基因 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA 第一步:获取目的基因 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA 3.采用DNA合成仪人工合成长度不是很大的DNA片段。 第二步: 基因表达载体的构建 总结:表达载体需由哪几部分组成 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 第三步:将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 第四步:目的基因的检测与鉴定 首先: 其次: 最后: 还要: DNA分子杂交技术 基因探针:核酸分子探针是指特定的已知核酸片段,能与互补核酸序列退火杂交,用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足:(1)必须是单链,(2)带有容易被检测出来的标记物。 如图所示,将人的生长激素基因导入细菌B细胞内生产“工程菌”,所用运载体为质粒A。已知细菌B内不含质粒A,也不含质粒A上的基因,质粒A导入细菌B后,其上的基因能得到表达。请回答下列问题: 如何将目的基因和质粒相结合形成重组质粒? ①用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个有黏性末端的切口; ②用同种限制酶切割目的基因,产生相同的黏性末端; ③将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处,再加入适量的DNA连接酶,使质粒与目的基因结合成重组质粒。 目前将重组质粒导入细菌细胞时,效率还不高;完成后得到的细菌,实际上有的根本没有导入质粒,有的导入的是普通的质粒B,只要少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒B或重组质粒:将得到的细菌涂布在一个有青霉素的培养基上,能够生长的就是导入了质粒B或重组质粒,反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是? (4)若把通过鉴定证明导入了普通质粒B或重组质粒的细菌放在四环素的培养基上培养,会发生的现象是? 原因是? (5)导入细菌A细胞中的目的基因成功表达的标志是什么? * * 基因工程的 基本操作程序 1.从基因文库中获取目的基因。 如果基因文库非常大,包含了一种生物所有的基因,那这个基因文库叫什么? 如果基因文库只包含了生物一部分基因,那又叫什么? 什么叫基因文库 基因组文库 部分基因文库 如何构建基因文库? 比较基因组文库和部分基因文库 阅读P10资料卡 通过对 受体菌的 培养而 储存基因 PCR:聚合酶链式反应 原料 前提条件是必须对目的基因有一定的了解, 需要设计引物。 目的基因与载体结合成为重组基因 需要 哪两种 工具 它们的作用是? 什么叫转化 常用的转化方法有哪些? 具体过程? 检测与鉴定哪些环节 具体 方法? 编码区上游 编码区下游 RNA聚合 酶结合位点 RNA聚合 酶结合位点 编码 蛋白质 原核细胞 真核细胞 真核细胞 人工获得目的基因的途径一般有哪两条? ①以目的基因转录成的mRNA为模板,反转录单链DNA,按互补原则合成双链DNA; ②据蛋白质中氨基酸序列推测出mRNA中碱基序列,再根据碱基互补配对原则推测出DNA碱基序列,通过化学方法合成目的基因。 *
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