代谢组学用于中药质量控制的方法学研究一LCMS全组分指纹分析评价复方丹参片的化学质量稳定性.pdfVIP

第十七届全国色谱学术报告会及仪器展览会会议论文集 P．B073 代谢组学用于中药质量控制的方法学研究(一)．LC／MS全组分指 纹分析评价复方丹参片的化学质量稳定性+ 吴泽明8，蔡铠阳¨，汪江山8，孔宏伟8 16023 8中国科学院大连化学物理研究所，中科院分离分析化学重点实验室，大连1 6南京理工大学化工学院应用化学系，南京210000 摘要：本研究将代谢组学的思路应用于中药质量控制，以复方丹参片为示范，基于HPL℃／QTOFMS 全组分指纹分析对其化学层面上的质量稳定性进行了考量，优选75％甲醇为最大化学信息表征溶剂， PCA分析显示不同药企品种间的化学质量差异较大，而同一药企相近批次间的化学质量相对稳定。 关键词：中药，质量控制，液质联用，指纹分析，模式识别，复方丹参片 前言 当前，中药质量控制的方法学缺失是制约中药产业升级的瓶颈问题之一，传统的药效成分含量 测定和基于LC—UV／ELSD技术的中药指纹图谱技术所表征的化学信息有限，不足以反映中药化学质 量的全貌。考虑到中药是化学组成极端多样的复杂体系，中药药品的质量稳定性应当从化学层面的 质量稳定性和生物效应层面上的稳定性逐次渐进地进行解构。代谢组学以化学指纹分析和模式识别 为核心，面向复杂生物体系分析的普适性契合中药质量控制中涉及到的化学表征与生物效应表征等 系列命题。本研究以复方丹参片为示范品种，首先利用代谢组学的方法学对其化学层面的质量稳定 性进行了考量。 l 实验部分 1．1仪器、试剂与药品 6510 MS质谱数据软件，SIMCA．P模 Agilent1200型RRLC，AgilentQ．TOFMS，GeneSpring 式识别软件。40份复方丹参片药品购自大连多家OCT药店，来源于27家药企，其中4号药企3个 批次，5号药企5个批次，6号药企6个批次，14、17号药企各2个批次。 1．2样品制备与分析 复方丹参片除去包衣，研碎，精确称取0．2g，加入黄芪甲苷内标溶液，75％MeOH超声提取30 mm)分离，0．1％甲 rain，药液过O．22¨m微孑L滤膜。使用ZorbaxSB．C18色谱柱(1．8岬，3．0x50 酸水／乙腈梯度洗脱，流速0．4 干燥气350℃，流速llL·min～：质量扫描范围100．1400m／z。分析顺序完全随机，使用PooledQC 和10种标样组成的混标进行分析质量控制，每8个样品，进样分析Pooled QC和混标一次。 1．3数据处理 MS进行峰提取，保留时间校正，缺失值过滤和内标归一 使用分子特征提取算法和GeneSpfing 化处理，将生成的数据矩阵导入到SIMCA．P中进行主成分分析(PCA)。 2结果与讨论 2．1浸提溶剂的优选 全组分化学指纹分析中首要的考量是优选化学信息表征最大化的溶剂。实验对9种溶剂体系对 复方丹参片中药效成分的浸提行为进行了考察，结果75％MeOH所表征的化学信息最为丰富，同时 聚类分析结果表明75％MeOH能综合地反映复方丹参片中水溶性与脂溶性组分的存在信息(图1)。 2．2复方丹参片的质量稳定性 PCA分析显示不同药企生产的复方丹参片间质量差异显著(图2)，这可能与原料来源不同、制 剂工艺差异等因素有关。而同一药企相近批次的复方丹参片质量相对稳定，在PCA得分散点图中相 邻地聚集在一起。例如6b、c、e样品为6号药企2008年3．5月间批次接近的药品，这提示提示我 们只要能加强原料药的来源控制，或对不同来源的原料进行勾兑处理，严格过程控制，是可以实现 中药药品的化学质量稳定性的。 PCA得分散点图中5个Qc样品紧密聚集，质控混标中lO个靶标物质的保留时间、峰面积的 ‘国际科技合作项目(2007DFA31060)：代谢组学用于中药质量控制的方法学研究 617