专题2《细胞工程》：2.2.2《动物细胞融合与单克隆抗体》课件(新人教版选修3.新.ppt

动物细胞融合与单克隆抗体 榆树市第一高级中学 生物 任成兰 复习提问 植物体细胞杂交的过程 自学与思考： 1、什么叫动物细胞融合？ 2、动物细胞融合的过程？ 3、依据原理是什么？　 4、诱导细胞融合的方法有哪些 ? 5、动物细胞融合完成的标志是什么？ 6、动物细胞融合的有什么意义和用途？ 7、植物体细胞杂交与动物细胞融合 有哪些异同？　 　 (一)动物细胞融合 1、动物细胞融合概念 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。也叫细胞杂交。 2、动物细胞融合的过程 A细胞 B细胞 诱导融合 杂交细胞 有丝分裂 多个杂交细胞 *膜融合 质融合 核融合 4、诱导细胞融合的方法 3、依据原理 细胞膜的流动性 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒 （灭活的仙台病毒） 【易误警示】　(1)常用的病毒诱导剂有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。 (2)用做诱导剂的病毒必须事先灭活，使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。 过程： 5、动物细胞融合完成的标志是什么？ 杂交细胞进行有丝分裂 (1)意义:细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能 6、动物细胞融合的意义和用途 (2)用途：主要用于制备单克隆抗体 7、比较植物体细胞杂交和动物细胞融合 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原 理 融合前处理 诱 导 方 法 用 途 细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性 细胞膜的流动性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用胰蛋白酶 使细胞分散 物理、化学方法 物理、化学、 生物方法 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ 4、抗体的分布？ （二）单克隆抗体的制备 思 考：如何获取某种特定抗体？ 1、抗体的传统生产方法 再从动物血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 输入 浆细胞 动物体内 某抗体 某抗原 思考与探究： 如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？ 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交瘤细胞 既能分泌一种特异性抗体 又能无限增殖 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想： 2、单克隆抗体的制备过程 自学与思考： 1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？ 为什么要这样处理？ 2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？ 3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？ 4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？ 5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交 瘤细胞具有什么特点？ 6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？ 2单克隆抗体的制备过程 杂交细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 整个制备过程要经过两次筛选 第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）， 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞的特点 既能迅速大量增殖又能产生特异性抗体 ※知识拓展： 如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。 单克隆抗体：特异性强、灵敏度高，并可大量制备。 3、单克隆抗体的优点 4、单克隆抗体的应用 (1) 可用于作为诊断试剂： 有准确，高效，简易、快速的优点 (2)可用于疾病治疗和运载药物 “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 （有导向作用） 例题1下列关于单克隆抗体的制备和应用的叙述中， 不正确的是