南阳牛IGFⅡ基因第二外显子多态性研究.pdfVIP

184 ca中国动物遗传育种研究进展 南阳牛IGFⅡ基因第二外显子多态性研究① 张争锋1② 陈宏1，2③ 薛恺1王珊1王新庄3王居强3’ (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌，712100) (2．江苏徐州师范大学细胞与分子生物学研究所，徐州，221116) (3．河南省肉牛工程技术中心，郑州，450003) 富。检测到两种等位基因A和B，频率分别为o．5471和04529。A等位基因在群体中稍占优势。A等 住基因包括185 bp和32bp两个片段，118hp、67 平衡状态。 关键词：IGFlI；南阳牛；PCR—RFLP；多态性 南阳牛是我国五大优良黄牛品种之一，具有体格高大，耐粗饲，抗逆性强等优点，但后躯不发达，产 肉率低，屠宰性能差等缺点，严重影响了南阳牛的经济效益，为r改善南阳牛的产肉性能，为给育种和改 良繁育工作提供理论依据，尽快将其培育成为优良的肉用牛品种，本实验对生长发育密切相关的胰岛素 样生长因子2遗传多样性进行了分析。 胰岛素样生长因子2(insulin，likegrowthfactor 岛素．胰岛素样生长因子一释放生长J到j：家旅的成贝之一，它与有促进有丝分裂活性作用的胰岛素具有 结构|：的同源性．现已证明，ICF2至少在啮齿类动物中是促进有丝分裂的主要生长因子…。人和绵羊 IGF2基因至少禽有9个外显子，大鼠、小鼠和马含有6个外显子，在不同发育阶段和特异组织中，其表达 35kb区 受不同启动子和选择性剪切所调控。人的IGF2基因被定位在染色体11P”，跨越基因组DNA 12kb 子和3个启动子，大约跨越基因组DNA 紧密相关。IG砣缺乏与人类身材矮小相关，它们的过度表达与肢端肥大自关_6J。 l材料与方法 1．1实验材料 液基因组DNA。 1．2实验方法 ①基会项目：国家自然科学基金，河南省杰m人爿创新基金(052IIX)1900)资助 ②作者简介：张争锋(1980-)，男，陕西蓝田人，在凌硕士生，专业方向：动物分子遗传学n J@126㈨n Email：ZhzhJj．9089 ③通讯作者：陈宏(1955 net )，男，教授，博导，研究方向：分了生物技术与动物育种。E-mail：ehee,h曲91212@263 反刍动物分子遗传与育种∞185 子全长217bp，然后用限制性酶肪rI酶切，统计分析各种基因型在南阳牛群体rp的分布。 1．2．1引物序列Fom,ord：5’CUIEAGCCTCATCCCCTCC’1711℃C3’ Reverse：5’CTC‘n：C1ICTATll℃C7I．cTG‘【1℃T[m’ I 2．2 PCR扩增体系(15td) 5 DNA 10×Buffer(含Mg一)1pl；dNTP 9．9／A；总体积15id。 Polymerase(鼎国公司产，0．5U／91)1．O,ul；DNA模板1．Opl；ddH20 ’ 1．2．3PCR扩增程序 94℃4min，94。C50s，64。C50s，72TJ50s，34个循环后，72。C延伸10min，4cC保存。 1．24酶切 取PCR扩增产物8出，然后加入5u／p1的限制性内切酶Bsd 3h。用3％的琼脂糖凝胶电泳检测，EB染色，Kodak凝胶成像系统照相分析