微生物与重金属之间的相互关系绪论.pptVIP

1.重金属污染对微生物群落多样性的影响 微生物可以影响重金属的活性，同样重金属在短时期内可 以降低微生物的活性，污染严重时还会降低微生物的生物数 量。如图所示分析模型1和模型2： 2.土壤重金属污染对微生物功能多样性的影响 （1）影响微生物对碳源的利用； （2）降低了微生物的代谢效率； （3）通过16SrDNA-DGGE分析重金属影响微生物的生理结构，但是没有对其遗传多样性构成显著影响； （4）随着重金属污染程度的增加，细菌群落的代谢多样性也逐渐降低。 16SrDNA-DGGE技术基本路线 一 样品总DNA的提取： 1 实验器材：玻璃器材，铝盖，1.5mL离心管，螺口管，锆珠，搅拌器，4℃离心机。 实验试剂：PBS（0.05M，pH=7），水饱和酚，TE饱和酚，TN150，TE缓冲液，TAE缓冲液，NaAc (pH=5.2),氯仿/异戊醇（24：1）（V/V），96%冷乙醇，70%冷乙醇。 3 实验操作：细胞分裂、提取DNA 二、DNA的检测—琼脂糖凝胶电泳 1试剂和器材： 电泳缓冲液（1*TAE），溴乙锭（EB）染色 贮存液（1mg/mL）,0.25%溴酚兰，琼脂糖，双蒸水。电泳 仪，水平电泳槽，透射紫外灯，胶带纸 。 2.实验操作：1.2%琼脂糖凝胶的制备、点样、电泳 、观察 三、16s rDNA片段扩增 1 细菌通用引物： EUB-968Gc for：5′CGC CCG GGG CGC GCC CCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GAA CGC GAA GAA CCT TAC 3′ EUB-L1401 rev：5′ CGG TGT GTA CAA GAC CC 3 ′ 2 反应体系：反应液组成: 单个样品量、 MQ、dNTP、MgCl2、PCR缓冲液、引物968Gc for、引物L1401 rev、Taq DNA聚合酶、样品DNA 3、反应条件： 1、摸板热变性 5min 94℃ 2、摸板热变性 10s 94℃ 56℃ 35个循环 68℃ 3、退火（复性） 20s 4、延伸 40s 5、延伸（post-elongation） 7min 68℃ 4 产物检测：1.2%琼脂糖凝胶电泳 四 变性梯度凝胶电泳（DGGE） 1 实验试剂及配量 ：100%的贮存液、0%的贮存液、缓冲液、固定液、银染溶液、显影剂 2 实验操作：玻璃三明治的制备、胶的备制 、电泳 、染色、加固 3.土壤重金属污染对微生物遗传多样性的影响 例如： Sandaa等学者通过斑点杂交发现，重金属污染不同的两 种土壤，微生物群落结构没有显著差异；但随着重金属浓度的 升高，用探针ALF1b、CF319a和LGCb分离的种群比例降低， BET42a、GAM42a、SRB385和HGC69a分离的种群比例增加 了；RFLP聚类分析显示，污泥重金属含量高的土壤中细菌多样 性指数较高，而克隆文库聚类分析得到相反的结果。 研究中存在的问题： 1. 共存金属离子之间存在竞争吸附，但是有时出现协同作用，这种作用机制尚不清楚； 2. 研究中，可以通过增加EPS（胞外络合物）的浓度提高吸附效率，但是当EPS达到最大吸附浓度时，提高吸附效率需要通过怎样的手段需要进一步研究； 3. 由于EPS的多少随着微生物的生长发育而变化，因此怎样更好地控制微生物生长过程中的EPS需要更深的研究； 4.研究中选择的微生物的数量还是有限的，有待于扩大多更 多微生物的研究； 5.多数研究者只是对重金属污染影响微生物多样性的作用进行 了现象描述,深层次的机理研究还相对缺乏,有必要从群落、个 体、分子、基因等不同层次开展相关研究。 目前该领域的研究技术 目前重金属污染已经成为一个日益严重的环境问题，研究微生 物与重金属之间的相互关系具有至关重要的作用，目前该领域研究 采用的技术主要有: 1.通过16srRNA的基因扩增后测序，从而判断菌株的种类，通过高通量的方法来研究重金属胁迫下对微生物的多样性的影响。 2.以群 落水平碳 源 利用类 型 为基础 的B1oLoG氧化还原技术来研究土壤微生物群落功能多样性。 3.形态学分析技术：荧光显微镜 细胞结构分析：生物标记分子 （用高效气相色谱定量分析） 4.分子生物学方法： 核酸探针检测技术、引物扩增技术、电泳分离技术、微生物酶测定的方法（如蛋白酶、脲酶、 纤维素酶等活性测定方法）、 MAR-FISH（显微放射自显影—荧光原位杂交）， STAR-FISH（底物痕量自显影—荧光原位杂交）， MICRO-FISH（显微放射自显影—荧光原位杂