基于MEMS及自组装技术的安培型免疫微传感器.pdfVIP

基于MEMS及自组装技术的安培型免疫微传感器幸 许媛媛边超陈绍凤夏善红 中国科学院电子学研究所传感技术国家重点实验室 北京 100080 ElectroMechanical 摘要：基于微电子机械系统(1涯icro Systems，删s)技术以及自组装技术，结合 抗体的定向固定技术、免疾反应以及酶的放大作用，研制出新型的安培型免疫微传感器．采用MEMS 技术，在硅片上制备了分别以金、铂、铂为电极材料的工作电极、对电极以及准参比电极的微型三电极 系统．采用自组装技术，通过在金电极表面自组装一层硫醇单分子膜，再在膜表面自组装一层蛋白质A， 以静电吸附作用固定抗体伟己原)，然后利用免疫反应以及酶的放大作用，实现对相应抗原(抗体)的检测． 研究了采用自细装在微电极表面进行生物分子固定化的条件，探讨了传感器的响应特性．结果表明，这 种固定化方法对所固定的生物分子的生物活性影响小，并且安培型免疫微传感器灵敏度高，响应性能好． 关键词：MEMS组装技术疫微传感器硫醇蛋白质A抗体 1．引言 近年来，电化学免疫传感器在免疫生物分析领域以及传感器领域引起了人们极大的关注并得到广泛的发 展11-31。电化学免疫传感器具备独特的优点，与光免疫传感器相比，电化学免疫传感器不会受到生物样品的 浑浊度、对光的吸收以及淬灭等因素的影响，并且具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽以及易于小型化等 优点。 依据检测原理不同，电化学免疫传感器可以分为安培型、电位型和电导型。通常，安培型免疫传感器的 制备过程首先是免疫电极的制备，其次是在电极表面固定抗体，最后利用免疫亲和反应和酶对其底物的催化 放大作用实现对待测免疫物质的电化学检测。目前的安培型免疫传感器大多采用块体状的电极【4’5】(如，碳棒、 铂丝、金丝等)或丝网印刷制备的电捌6’刀(如，玻碳、金膜等)，这些电极的重复性和一致性不好，也不利于 传感器的微型化和集成化。另外，在抗体的固定化方面，传统的物理吸附法、化学共价交联法以及包埋法往 往存在传感器界面生物敏感膜的一致性差，有序性不高，并且固定化的生物分子容易失活。 ElectroMechanical 本文采用微电子机械系统(Micro 电极材料的工作电极、对电极和准参比电极的微型三电极芯片以及用于电化学反应和免疫反应的SU．8微型 反应池。采用自组装技术构建有序的多层自组装单分子膜，通过在金电极表面自组装一层巯基乙胺单分子膜， 再在膜表面自组装一层蛋白质A，以静电吸附作用固定抗体／抗原，然后利用免疫反应以及酶的放大作用， 实现对相应抗原／抗体的检测。 2．实验 2．1试剂与仪器 辣根过氧化物酶的底物H202、KI等由北京化学试剂公司生产：其他试剂均为分析纯等级；所用水为去 离子水。 MEC．12B型多功能微机电化学分析仪购于江苏江分电分析有限公司，用于研究电极表面特性以及免疫 反应的计时电流检测。 ·国家自然科学基金资助项目(批准号 396 2．2微型电极的翩备’ 采用正胶反刻方法得到工作电极图形，溅射Au，剥离形成工作电极；e．采用正胶反刻方法得到对电极和参 比电极图形，溅射Pt，剥离形成对电极和参比电极；￡SU．8胶光刻、显影，形成微型反应池。微型三电极 芯片的结构示意图如图1所示。 图l微型三电极示意图 (a)俯视图；Co)截面图。 2．3微型电极表面的修饰 溶液中保持2小时，使Au与巯基乙胺进行自组装，之后用去离子清洗；其次，将5}xL的蛋白质A溶液 (500lxg／mL，溶剂为50mmol／L 巯基乙胺．蛋白质A’’修饰Au电极韵传感器界面。 2．4抗体在微型电极表面的固定 PBS 将2此antiHIgG(500lxg／mL，溶剂为10mmol／L pH7．4)滴加在‘‘Au．巯基乙胺．蛋白质A”修饰的Au 电极表面，保持4C，4小时，使抗体的非免疫活性部位Fc片段特异地吸附于蛋白质A上，从而实现定向 2 PBS