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Section EDNA Replication E1: DNA Replication:An Overview 1. Replicons（复制子） 2.semi-conservative mechanism 3.semi-discontinous replication 4.RNA priming（引导） E1-1 Replicons 复制子：以单一单位复制的任一段DNA。 复制从特定的位点－起始点开始，两个复制叉双向进行至终点。 原核生物染色体：程环形 单一复制子 一个起始点（复杂） 密度标记实验 半保留机制：在复制中，DNA双螺旋的两条亲代链分开，分别作为模板指导酶催化的新生互补子链的合成。 这样每个子细胞接受亲代DNA双链中的一条。 DNA合成的底物：脱氧核苷三磷酸（dNTP) 反应机制：新生链3’端核苷酸的3’－OH与下一个碱基互补的a－磷原子处的亲核攻击。 E1-3 Replication isSemi-discontinuous E1-4 RNA priming The first few nucleotides at the 5’-end of Okazaki fragments are ribonucleotides. Hence, DNA synthesis is primed by RNA that is then removed before fragments are joined. Crucial for high fidelity of replication E2: BacterialDNA replication 1. Experimental system 2. initiation, 3. unwinding, 4. elongation, 5. termination segregation E2-1: In vitroexperimental systems Re-initiation of bacterial replication at new origins before completion of the first round of replication E2-3: Unwinding Positive supercoiling: 复制叉处螺旋转角的去除会导致分子其余部位额外转角的导入 . type II topoisomerase （DNA旋转酶） E2-4: Elongation(延伸） 引发体：包含DnaB解旋酶和DNA引物酶 DNA聚合酶III全酶：二聚体(Mg2+,dNTP, 5’－3’ , 3’-OH末端引物链,模版链) 单体 a亚基－聚合酶作用 ?亚基－外切核酸酶:3’－5’校正作用 ?亚基－将聚合酶结合到DNA上 其它亚基－不同,合成长或短的DNA DNA聚合酶I：切除引物，填补DNA 5’－3’ 聚合酶 5’－3’ 外切酶 3’－5’ 校正外切核酸酶酶 DNA连接酶：催化磷酸二酯鍵 E2-5: Termination andSegregation（终止与分离） ?Tus protein: ter binding protein, an inhibitor of the DnaB helicase E4: EukaryoticDNA replication 1. Experimental system 2. initiation, 3. replication forks, 5. telomere replication. E3-3: Replication fork elongation 其它DNA复制方式 DNA复制 E4 真核生物DNA复制：起始 实验系统 DNA：酵母（14000 kb / 400复制子）、SV40 cell-free system：非洲爪蟾 复制起始 早：常染色质，中：异染色质，晚：着丝点和端粒 自动复制序列（ARS); 起始点识别复合体（ORC) Replication fork E4 真核生物DNA复制：延伸和终止 相关酶和蛋白质 解旋酶 单链结合蛋白（RP-A，replication protein A） 延伸酶-