第三章细胞生物学方法解说.ppt

第三章 细胞生物学研究方法 本章主要介绍细胞形态结构的观察方法、细胞组分的分析方法、以及细胞培养和细胞工程方面的技术与研究。 考点分析 本章主要考查各类方法技术的原理及用途,考查形式多样。 光学显微镜技术主要考查分辨率及其影响因素,各种特殊显微镜的基本特点及应用范围. 电子显微镜技术则在设计原理及类型、样品制备技术（超薄切片、负染色、冰冻蚀刻、免疫电镜技术）的原理及应用方面以简答题形式为主。 考点分析 细胞内各种化学成分的定性、定位和定量分析技术、细胞化学与组织化学法、免疫细胞化学法、各种分光光度术、放射自显影和分子杂交技术等，考查的形式多以实验设计为主进行考查。 目录 第一节 细胞形态结构的观察方法 第二节 细胞组分的分析方法 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第四节 用于细胞生物学研究的模式生物 第一节 细胞形态结构的观察方法 本节主要内容： 一、光学显微镜技术 二、电子显微镜技术 三、扫描隧道显微镜 一、光学显微镜技术（light microscopy) ?(一)普通复式光学显微镜技术 ?(二)相差显微镜（phase-contrast microscope） ?(二)微分干涉显微镜 （differential interference contrast microscope, DIC） ?(二)录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） ?(三)荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?(四)激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） ?(五)荧光共振能量转移技术(36) ? (六)荧光漂白恢复技术 (一)普通复式光学显微镜 1. 普通复式光学显微镜组成 2. 普通光镜的成像原理 3. 普通光镜的应用优缺点 1.普通复式光学显微镜组成 判断题：在使用光学显微镜时，如果物镜不变，用10倍的目镜时的分辨率比用5倍的目镜高1倍。 （ × ） 比较放大率和分辨率的含义。 总结:物镜已经分辨清楚地细微结构，假如没有经过目镜的再放大，达不到人眼所能分辨的大小，那就看不清楚。但物镜所不能分辨的细微结构，虽然经过高倍目镜的再放大，也还是看不清楚。所以目镜只能起放大作用，不会提高显微镜的分辨率。 3.普通光镜的应用优缺点 优点：操作简便、样品制备简便、成本低 缺点：分辨率较低，图像反差小 应用：应用领域极为广泛，主要用于观察被检物的细微结构。 (二)相差显微镜(PCM) 1.原理:光线通过样品时，产生直射光和衍射光，相差板使两种光的光程差(相位差)[肉眼不可识别]增加，通过透镜后，二者互相干涉，所形成的合成光与背景光[直射光]的振幅差表现为肉眼可见的明暗反差。总之，相差显微镜把光线通过样品后形成的相位差(光程差)转化为振幅差(明暗图像) 2.应用 广泛应用于医学、生物学尤其细胞生物学。 优点：观察活体细胞，并且不需染色 （二）微分干涉显微镜(DIC) 1.原理 平面偏振光经棱镜折射后分成两束，在不同时间经过样品相邻部位后，再经另外一个棱镜使两束光汇合，从而把样品厚度上的微小差别转化为明暗区别。 2.应用 观察活细胞中较大的细胞器。 DIC显微镜使细胞的细微结构立体感特别强，适合于显微操作。目前像基因注入、核移植等生物工程的显微操作常在这种显微镜下进行。 (二)录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动。 录像增差显微镜中的颗粒及细胞器的运动 中的颗粒及细胞器的运动 (三)荧光显微镜技术 1.技术原理 2.结构性能 3.应用 1.技术原理 强光源发出紫外光和蓝紫光， 经过滤光系统， 照射到样品， 激发样品中的荧光物质发出可见荧光， 通过物镜和目镜放大成像， 观察和摄像 2.结构性能 (1)荧光光源---------高压汞灯、氙灯 (2)滤色系统 a.激发滤光片----选择激发光的波长 b.阻断滤光片----吸收或阻挡激发光进入目镜，防止成像干扰和保护眼睛 (3)光路系统 由光源、滤色系统、集光镜、反光镜、物镜和目镜等组成 3.应用 目前对特异蛋白质等生物大分子定性定位研究的最有力工具。 荧光显微镜技术包括: 荧光素直接标记技术和间接免疫荧光标记技术 优点：图像清晰，灵敏度高，细胞内物质可做特异性观察与分析 (四)激光扫描共焦显微镜技术(Laser Scanning Confocal Microscopy、LCM) 1.原理：激光源经过双色镜反射，经物镜后汇聚到样品(预先经免疫荧光标记)的某一焦点，从焦点发