细胞电泳实验概要.pptx

实验十二 细胞电泳 ? 制作人：单成彬 Review about basic theory and experimental methods of a niubility method 目录 CONTENTS PART ONE 实验目的 4 了解细胞电泳的原理及意义 学习细胞(包括细胞器)电泳速度及其ζ电位的测定方法。 PART ONE PART TWO PART Two PART TWO 二、实验原理 6 所谓细胞电泳，就是将细胞制成悬浮溶液．使其单个游离的细胞分散于等渗的介质中。在外电场的作用下，细胞在特殊的装置内发生运动．这种现象称作细胞电泳。 细胞表面具有一定的电荷(通常为负电荷)，它能象无机离子一样均匀地分布在介质中。细胞表面吸附了一层极薄的水膜，它与介质间存在着电位差，此电位差称为ζ电位。每种细胞在恒定的条件下(如温度、电压、电流，介质浓度，溶液的PH值等)其电泳速度和ζ电位十分稳定，但在各种有害因子病理状态的影响下，可降低其表面电荷，所以电泳速度和ζ电位值也发生改变(降低)。因此，利用细胞电泳对研究生命结构的表面性质，鉴定细胞或单细胞有机体的机能和病理状态，具有重要的意义，是一种十分有用的方法。 PART THREE 实验用品 8 鼠全血细胞，菠菜叶绿体。 细胞电泳仪，光学显微镜，电子表，台微尺，目微尺，细胞电泳架， 电泳毛细管，吸血量管，洗耳球，盐桥等。 1．生理盐水甘油溶液：O.9％NaCl，0.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V (国际单位)的肝素。混匀备用。 2．8％蔗糖甘油溶液：8％的蔗糖，O.32M甘油溶液，每毫升加入4-5V(国际单位)的肝素，混匀后备用。 材料 用具 试剂 PART FOUR 试验方法 10 (一) 细胞电泳前的准备工作 11 第一步 第二步 第三步 第四步 显微镜固定及毛细管和银电极的清洁 12 第一要点 第二要点 第三要点 选可翻转的显微镜以免细胞在电泳时迅速下沉，脱离观察面。 用肥皂水(最好用十二烷基磺酸钠)冲洗毛细管电泳室，然后用清水冲洗数 次。 用普通纱布将电泳架两端的银电极擦干净，以免正反两方向的电泳速度显著不一样。 (二)细胞(或细胞器)电泳速度及ζ电位的测定： 13 01 02 03 ．插入直流输出引线，并注意电极夹的正负极短路，以免损坏仪器。 14 04 05 06 将电泳架移至显微镜载物台上，调整焦距，使焦面落在管腔的d／lO—d／15处。为了对照可测d／2处的电泳速度。 07 通过直流输出引线夹，分别与两极接通。 08 测量 (1) 将开关调至“工作”档，再调节电压使其达到原来(即操作4中所调)的水平，由于电场作用，在视野内可观察到管腔内细胞的移动。记录某个细胞通过目微尺2格的时间。 (2) 将开关调至“停止”档，细胞即停止移动。 (3) 将换向开关调至“负”处，调整高速开关调至“工作”档，由于电流方向变更，则细胞向相反方向移动，此时再选择一细胞按上述方法，记录下电泳时间。 (4) 如此反复测量多次，分别记录实验数据。 (5) 实验结束后，将电压及电流二钮调回到“0”处，调整开关至“停止”处，并断开电源；将毛细管洗干净，同时将电极擦净，放回原处，显微镜恢复到直立状态。 9．电泳速度计算：根据所测目微尺的实际刻度值，计算出每次的电泳距离S，所测电泳距离的总和除以所测时间的总和，得出电泳的平均速度，以下式表示： w×r 10．ζ电位的计算：根据所测电泳速度，可用下式求得ζ电位： THANKS