基于溶胶凝胶体系自组装金纳米粒子HCG免疫传感器研究.pdfVIP

篁垄星全璺堂堑垡兰兰查叁塑望壅塑差塞 皇皇些兰竺塑堡壁曼兰竺塑坌堑些兰 C的基于溶胶凝胶体系自组装金纳米粒子He8免疫传感器研究 陈进1张怀畅1邵心力1严枫2鞠煜先1，+ (1．南京人学化学化．，1．：学院，生命分析化学教育部重点实验室，南京210093； 2．江苏省肿瘤医院，南京210009) 摘要：利用(3一巯基丙基)一三甲氧基硅烷(MPS)滴涂在预处理玻碳电极表面形成一层含有 游离--SH和--SiOH基团的功能化硅胶修饰层，自组装金纳米粒子构建纳米金粒子掺杂硅凝 胶多孔复合膜体系，构建新颖的固相免疫传感器，用于测定人血清中HCG含量。该复合膜 排列有序，具有较好的亲水性和生物亲合性，可用于吸附HCG抗原，通过竞争免疫反应结 合HRP标记HCG抗体，利用HRP对邻苯二胺一过氧化氢体系的催化作用，采用示差脉冲伏 安法测定人血清中HCG抗原的含量，发展新型的HCG免疫传感器，该传感器制备方便，性 能稳定，实验表明在临床应用上有良好的前景。 关键词：免疫传感器，溶胶凝胶，自组装，金胶纳米粒子，玻碳电极 HCG(绒毛膜促性腺激素)是一种水溶性糖蛋白。分子质量为37kDa,它是孕妇怀孕期间 由胎盘滋养层合成的第一个糖蛋白。滋养层肿瘤和大量非滋养层肿瘤也分泌该物质。测量人 体血清和尿中的HCG含量对妇女妊娠的早期诊断具有重要意义，并可用于现代免疫怀孕测 试和各种胚胎滋养层疾病的控制。 近年来，由于电化学免疫分析法成功地将免疫反应的高选择性和电化学测定的高灵敏度 相结合而越来越受到人们的重视。其测定灵敏度与放射免疫法相近而不需使用放射性同位 紊，充分显示了它在临床检测中的优越性和发展前途。本文利用MPS溶胶凝胶良好的生物相 容性，通过自组装金纳米粒子形成纳米金掺杂凝胶复合膜体系，将HCG抗原固定在玻碳电 极表面，发展新型的HCG免疫传感器。在辣根过氧化酶标记的HCG抗体的协助下，利用竞 争免疫分析方法测定HCG抗原的含量。 1实验部分 1．1试剂与仪器 HCG检测试剂盒，牛血清白蛋白(BSA)，(3一巯基丙基)一三甲氧基硅烷(MPS)， 邻苯二胺和H202，HAuCl4·3H20，二水柠檬酸三钠，其它试剂均为分析纯，实验溶液用 Milli—Q净化柱所采集的二次水配制。采用BASl00B电化学分析仪和三电极系统进行电化学 测定。参比电极为饱和甘汞电极，铂电极 为对电极，工作电极为修饰的玻碳电极。 mM 配制含有0．04％BSA和1．0EDTA的 7．0)为稀释和温育液。 PBS缓冲液(pH 1．2硅溶胶一凝胶液制各 混和MPS溶液和二次水(摩尔比为l： mol／I 4)，10％乙醇和3．3％的0．1HCi，混 合溶液超声20 min后得到均一透明的溶 液，置于冰箱中保存。 1．3 图1 HCG免疫分析测定过程 HCG免疫传感器制备 247 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传感器与生物分析化学 玻碳电极(直径约为4mm)分别用粗砂纸、细砂纸、A1203悬浊液抛光至镜面，用二次 水超声处理后，先在0．IM min，再将电 pH5．0的PBS中将玻碳电极上在1．75V电位下氧化5 极分别在±1．3．0．3V之间循环扫描30圈至得到稳定的循环伏安峰。氮气吹干电极。在电极表 300 mlU／mi 面滴涂5此MPS溶液，干燥后浸入金胶溶液中10min，取出滴涂3 HCG，置 p．1 于干燥器中干燥。 1．4免疫分析过程 50