基于溶胶凝胶材料的乙酰胆碱酯酶生物传感器的研究.pdfVIP

第十届全国化学传感器学术会议论文摘要集 B生物传感器 B1 2基于溶胶一凝胶材料的 乙酰胆碱酯酶生物传感器的研究 王朝瑾，袁金凤，李彦磊 (上海海洋大学食品学院．上海200090) 摘要l采用溶胶一凝胶技术将乙酰胆碱酯碑固定在混合歼堆薄膜上，再将酶膜固定在玻碳电极上。制备了可 用于有机磷农药检测的电流型乙酰胆碱酯酶生物传感器。对影响酶固定化及影响酶对底物响应的主要因紊匀-j,j进 X 行了考察。获得最佳酶的固定化和反应务件。并利用该倍感器对甲胺磷农药进行检测。检测下限可迭6．31 10-10mol／Lo 生物传感器是利用生物活性组分特有的识别能力，与可感知这一识别过程的信号转换器结合 在一起组成的一种小型分析器件【l】。本实验用正硅酸四乙酯(TEOS)为前驱体制备溶胶一凝胶， 将乙酰胆碱酯酶(ACHE)固定于纤维薄膜上，制备了电流型乙酰胆碱酯酶生物传感器，采用循 环伏安法进行测定．研究影响酶的固定化效果和反应条件的主要因素，旨在制备性能优良的酶生 物传感器。 1．实验部分 I．I酶电极的制鲁 1 TEOS、0．75mL水、0．3mLl 20的盐酸，涡流混匀15 在10mL的试管里依次加入0．75n-,_L 分钟，至溶液完全澄清后加入50vLPEG400．涡流混匀，4C水解过夜，即为溶胶～凝胶溶液。依 7．0的磷酸盐缓冲液于ImL pH 次取2．5此溶胶一凝胶溶液、5止(O．2U／肛L)AChE及4此0．Imol／L 的塑料离心管中，充分混合均匀．然后用微量进样器将混合酶溶液涂抹到活化好的纤维薄膜上， 4C下固定24小时。固定好后将酶片取出，用橡胶圈将其固定到玻碳电极上，即得酶电极。 测定前先将酶电极在含1％甘氨酸的0．Imol／L7．O的磷酸盐缓冲液中采用循环伏安法反复 pH 扫描，使酶活化．不用时，可将酶片于干燥的2mL塑料离心管中4C保存。 1．2测定方法 7．0的磷酸盐溶液作为支持电解质，放入恒温电解池中，水浴温度控制 取4．0mL0．Imol／LpH 在25C，酶电极为工作电极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为对电极．在0．3-I．0V电位区 间内进行循环伏安扫描至基态电流稳定．加入ImL0．01mol／L的底物氯化乙酰硫代胆碱 (ATChCl)，再次进行循环伏安扫描，测定其稳定的 响应电流I。 2．结果与讨论 2．1酶电极对底物的响应 AChE可催化底物ATChCI水解产生乙酸和巯基胆 碱，其中巯基胆碱具有电活性，可在玻碳电极表面发 生氧化反应，产生的电信号可转化为电流，在一定条 件下该电流的大小可反映AChE的活性。 mol／L 图1AChE电极在含(a)0mol／I．,(b)2．0x10’3 图l为AChE电极在含(a)0mol／L(b)2．0x103 ATChCI的磷酸盐缓冲液中的循环伏安图 mol／LATChCI的磷酸盐缓冲液中的循环伏安图。由图 26 第十届全国化学传感器学术会议论文摘要集 B生物传感器 可见，阳极化扫描在0．66V左右处有一氧化峰，而阴极化扫描无峰出现，表明该电极反应不可逆， 与文