基于目标分子引起金纳米颗粒聚集体构建的双功能生物传感.pdfVIP

第十届全国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器与生物电化学分析 D89基于目标分子引起金纳米颗粒聚集体构建的双功能生 陈苗，常竹，徐颖，何品刚’，方禹之 (华东师范大学化学系上海200062) 本文运用金纳米颗粒修饰的特殊设计寡聚核苷酸序列作为探针，通过探针和目标 物的特异性结合构成网状结构富集目标物，构建了可用于检测DNA和凝血酶(Tb) 蛋白的生物传感器。实验中，通过Au．S键将金纳米颗粒聚集体连接到硫代三聚氢酸 的信号实现对目标物进行定性定量检测，检测限为10。15mol／L数量级。 l实验部分 1．1仪器和试剂 mm的金 CHl630电化学工作站(usA)，常规三电极系统：工作电极为直径为2 mol／L 电极，参比电极为Ag／AgCl(3．0KCl)，对电极为铂丝。 所用寡聚DNA均由上海生工生物工程公司合成： GTTGGCGCGCATGCT Pl：5’．GTG TTC 凝血酶特异性结合【l，2】)。 DNA． TCG一3’，一硐：基 Target TCG．3’．非互补序 AAC．3’。 1．2传感器的构建 DNA加入到含有Pl，P2修饰的金纳米颗粒的探针中，当杂交发生后 首先将target 会形成P。．targetDNA．P：金纳米颗粒聚集体。通过电聚合方法，在金电极表面修饰硫 代三聚氢酸(TCA)，由于硫代三聚氢酸是一个星形的三巯基(-SH)分子【3】，所以修饰 体后，金胶和金电极上的自由毓基形成Au．S键，从而被捕获到电极表面；将捕获后 的电极与5×10。5mol／LMB作用5rain，使得聚集体中自由的鸟嘌呤和亚甲基蓝(MB) 充分结合【4】。作用后的电极直接作为工作电极，用微分脉冲伏安法(DPV)测得MB信 号(．O．23V)，从而实现对目标DNA的检测。整个实验过程如下图(a)所示。 纳米颗粒聚集体。 静凄泳燧瘘辫r (a) 詹 ^专 。；。。 ， -l夸———— 实验步骤示意图 第_f．届全国电分析化学会议论文集 电化学生物传感器‘j生物电化学分析 2结果与讨论 2．1对目标物的特异性识别 为了确定该传感器对目标DNA的特异性识别，我们分别将相同浓度的目标序列、 非互补序列、一碱基错配序列与探针发生杂交反应，如上述实验路线a进行。实验结 果表明该方法对存在碱基错配的DNA片段有很强的序列选择性。 基于实验示意图路线b，分别将相同浓度的凝血酶、牛血清白蛋白、溶菌酶与探 针进行培育反应，观察了该传感器对凝血酶的特异性识别。结果发现Pl和P2对凝血 酶具有很高特异性识别，非特异性识别的蛋白质如牛血清白蛋白、溶菌酶对凝血酶蛋 白的检测几乎无干扰。 2．2对目标物的定量电化学检测 将2．0×10’lSmol／L～2．0x10’10 mol／L的一系列浓度靶DNA分别与Pl，P2修饰的金 纳米颗粒探针进行杂交反应，富集MB后进行电化学测定。结果发现，随着目标序列 mol／L。 好的线性关系，检测限为7．6×10’16 mol／L。 3结论： 本文基于目标分子引起金纳米颗粒聚集成功地构建了可用于检测DNA和凝血酶 蛋白的生物传感器。 参考文献： Xiao，v．P [1】Y 126，74