第53课时血红蛋白的提取和分离[第1课时].docVIP

北大附中河南分校高二生物教学通案 课题：课题3 血红蛋白的提取和分离（第1课时） 领导签字： 时间： 13年 6月 5 日 序号：53 备课人：楚素霞 教学目标： 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 3.体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤 ★课题重点 凝胶色谱法的原理和方法 ★课题难点 　样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 教学活动 学生活动 一、情景导入（1分钟） 蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？ 二、自主预习（8分钟） （一）凝胶色谱法要点：1.凝胶色谱法的用途；2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理。（二）缓冲溶液要点：1.缓冲溶液的组成和作用机理；2.熟悉一般缓冲溶液的配制方法；3．缓冲溶液广泛应用于生化实验、微生物的培养、组织切片和细菌染色以及酶的研究等方面（三）电泳知识要点：1.电泳的基本原理；2.不同类型的电泳。1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。 2、原理 （1）由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。 （2）当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。 （二）、缓冲溶液 1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。 2、配制：由 种缓冲剂溶解 于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 （三）、电泳 [来源:Zxxk.Com] 1、概念：指 在电厂的作用下发生 的过程。[来源:学科网ZXXK] 2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。 3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。 4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通常使用 。 三、教师精讲（10分钟）1．基础知识 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．1凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程：（图5－13b） 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 1．2缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 1．3凝胶电泳法： （1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 ［思考］阅读教材后，填写下表： 决定运动方向 形成库仑力 形成阻力 决定运动速率 电荷性质 √ 电荷量 √ √ 分子形状 √ √ 分子大小 √ √ （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。 （3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小