实验四RNA的提取及其组分的鉴定答案.pptVIP

（２）核糖 　　　　取0.5ml水解液+0.2ml苔黑酚+2ml三氯化铁盐酸溶液，沸水浴10min，观察颜色变化（亮绿色） （３）磷酸 　　　　取0.2ml水解液+0.8ml水 +1ml定磷试剂 ，沸水浴10min ，观察颜色变化（蓝色） 酵母核糖核酸的分离 及组分鉴定 学习从酵母中提取RNA和鉴定RNA组分的方法。 一、实验目的 二、原理： 核酸（nucleic acid) 核苷酸(nucleotide) 磷酸(phosphate) 核糖(ribose) 嘌呤（嘧啶）碱 Purine (pyrimidine) base 核苷(nucleoside) RNA(ribonucleic acid)背景知识 细胞RNA通常都是单链分子（但病毒RNA双链、环状、线型等多种形式），由核糖、碱基（A、U、G、C）和磷酸组成，其种类繁多。目前有许多具有特殊功能的RNA不断被发现，几乎涉及细胞功能的各个方面，其中参与蛋白质合成的RNA有三类：转移RNA（transfer RNA）、核糖体RNA（ribosomal）和信使RNA（messenger RNA）。 研究表明，RNA不仅仅是遗传信息的中间传递体（from DNA to protein）。RNA的功能总结起来可以分为以下几类：控制蛋白质的合成；作用于RNA转录后加工与修饰；基因表达与细胞功能的调节；生物催化与其他细胞持家功能；遗传信息的加工与进化。 　　RNA和DNA分别存在于细胞质和细胞核中，分离提出核酸，首先要将破碎制成匀浆、使核酸充分提取出来。 　酵母核酸中RNA含量较多RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。但蛋白质的存在干扰核酸的测定，因此在沉淀中加入95%乙醇溶液洗涤，以除去蛋白，由此可得到RNA的粗制品。 RNA的分离 RNA在硫酸液中煮沸可水解成核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸，可分别进行鉴定。 组分鉴定 　核糖+（嘌呤碱or嘧啶碱）+磷酸 核苷酸 三、材料与试剂 1、酵母 2、0.04mol/L的NaOH溶液 3、酸性乙醇溶液 　0.3mL浓盐酸加入到30mL乙醇中 4、95％乙醇溶液 5、乙醚 6、1.5mol/L硫酸溶液 7、浓氨水 8、0.1mol/L硝酸银溶液 9、三氯化铁浓盐酸溶液 　　2mL10％三氯化铁加入到400mL浓盐酸中 10、苔黑酚乙醇溶液 　　6g苔黑酚溶于100mL95％乙醇（4℃保存） 11、定磷试剂 （１）17％的硫酸溶液　　 （２）2.5％钼酸氨溶液 （３）10％抗坏血酸溶液 （４）蒸馏水 使用时按下比例临时配置（体积比）： 17％的硫酸溶液: 2.5％钼酸氨溶液:10％抗坏血酸溶液:蒸馏水＝1 : 1 : 1 : 2 四、实验步骤 １、酵母RNA的提取： 取酵母1.0g（3片）、 0.04MNaOH+8ml 研磨匀浆 沸水浴20min 离心10min（3000r /min） 冷却至室温 收集上清液于离心管 离心管中 加入7mL酸性乙醇沉淀RNA 离心3min（3000r /min） 收集沉淀 95%乙醇洗沉淀一次， 无水乙醇洗沉淀一次 离心3min（3000r /min） 沉淀即为RNA粗品 离心3min（3000r /min） 2、RNA组分的鉴定 RNA的水解： 　　用10m1.5mol/L硫酸溶液小心将RNA沉淀洗至试管中，沸水浴10min，冷却后离心，然后将上清液定容至100mL,分别取1mL至两个1.5mLEp管中留做定量用,余下做定性分析。 RNA组分的鉴定： （１）嘌呤碱 　　　取水解液1ml+浓氨水（5滴）+1mlAgNO3，观察嘌呤银化合物 　　的絮状沉淀。 （２）核糖 　　　　取0.5ml水解液+0.2ml苔黑酚+2ml三氯化铁盐酸溶液，沸水浴10min， 　　观察颜色变化（亮绿色） （３）磷酸 　　　　取0.2ml水解液+0.8ml水 +1ml定磷试剂 ，沸水浴10min ，观察颜色变 　　化（蓝色） 五　思考题 　 １、如何得到高产量的RNA粗品？ ２、本实验RNA组分是什么？怎样验证？ 无水乙醇洗沉淀一次 离心3min（3000r /min） 沉淀即为RNA粗品 　　用10ml 1.5mol/L硫酸溶液小心将RNA沉淀洗至试管中，沸水浴10min，冷却后离心，然后将上清液定容至1