基于纳米技术的新型HBsAg免疫传感器.pdfVIP

基于纳米技术的新型HBsAg免疫传感器 基选莲”，邱建丁1，蔡沛祥2 (1．南昌大学化学系，南昌330047； 2．中山大学化学与化学工程学院，广州510275) 近年来，以纳米粒子构建各种纳米结构功能膜越来越受到人们的青睐。纳米尺寸的 金颗粒具有比表面积大、吸附力强、生物相容性好等物理化学特性，在材料学、电子学、 生物医药以及临床诊断等研究领域均有重要应用““。本文结合溶胶一凝胶的三维网络结 构、自组装技术和纳米粒子效应设计传感器界面，实现乙肝表面抗体(HBsAb)的固定化， 研制出一种用于检测乙肝表面抗原(HBsAg)的电化学免疫传感器。结果表明，该固定化 方法大大提高了固定化抗体的活性，纳米粒子的表面效应显著提高了传感器的灵敏度。 1实验部分 将经预处理的金盘电极室温下置于3一巯基丙基．三甲氧基硅烷(MPS)溶胶一 凝胶中lh，清洗、干燥后置于金胶溶液中于4℃保持10h，然后将得到的BGE／MPS／Au 电极于HBsAb中室温下培育1h，再置于0．1％的BSA溶液中室温培育20min，以封闭 4℃干态保存备用。 电化学测量采用三电极系统，sol。gel．HBsAb电极在不同浓度的HBsAg溶液中 于室温下培育20min后，用清洗液和PBS充分冲洗表面所得电极为工作电极， ．0．1mol，L氯化钾一50raMPBS为测试底液，以CV法考察电极表面不同修饰状态的 电化学特性：以DPV法研究传感器对HBsAg的定量检测。 2结果与讨论 2．1免疫传感器制备过程的电化学行为 实验过程中选择铁氰化钾为探针对传感器的各组装步骤进行考察。图1是不同状态修饰 电极在底液中的循环伏安曲线。由图可见，裸电极在底液中呈现一对峰形很好的循环伏 安曲线，峰电位差AED=80 mV，如图l(a)所示。当将电极置于MPS溶胶．凝胶中组装 1h后，所得氧化还原响应电流下降，可逆性变差，如图1(b)所示，且随自组装时问的增 长，响应电流进一步下降，甚至消失，如图l(c)所示。继而将sol—gel修饰电极浸入纳米 金溶液中后，所得氧化还原响应电流则呈现部分恢复的趋势，如图l(d)所示。当把HBsAb 分子固定于电极表面后，氧化还原响应电流随HBsAb浓度的增大呈逐渐下降趋势，如图 1(e)所示。当将以上电极置于不同浓度的HBsAg中培育后，铁氰根离子的响应电流进一 步下降，如图I(0和图!(g)所示。由此可见，通过以上步骤，HBsAb被成功固定于电极 表面，且保持了良好的生物活性，从而得到了理想结构的生物传感界面。 ‘联系人：梁汝萍…E-mail：Lian2To@163．eom 44 2．2免疫传感器对HBsAg的响应特性及应用 将制备的s01．gel．HBsAb电极分别置于不同浓度的BBsAg标准血清中培育 20min，于底液中测定响应电流，制作校准曲线，结果表明，在2—360ng／mL范围 内，响应电流与HBsAg的浓度呈现良好的线性关系。 将制备的s01．gel．HBsAb膜电极置于临床血清中培育20min后按实验方法检测 uA作为乙型肝炎的阳性判据。本法与酶联免疫 响应电流，以响应电流小于13．98 吸附法(ELISA)对临床血清进行试验比较，符合率良好，部分结果列于表l。 j乎 ：}妒 圈I不同修饰状态的电极在0．5 (a)裸电极；(b)在MPS HBsAg中培育． 表1不同方法对临床血清的分析结果 血清样品+’ 1 2 3 4 5 16 17 18 19 2031 3233 3435 免疫传感器(±) 一 + 一 - + + 一 + + + ． + + - + 一 一 -4- 一 一 - + + + 一4-4-4-+ + EUSA法(±)·# + 样品稀释100倍，一+阳性血清；一阴性血清 参考文献： 1． K．C，Grabar,R．G．Freem