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基于胶体金快速检测凝血酶 王壹，羊小海，王柯敏’，谭蔚泓 (化学生物传感与计量学国家重点实验室，湖南大学生物医学工程中心，湖南 省生物纳米工程技术研究中心，长沙410082) 凝血酶是一种多功能丝氨酸蛋白酶，是凝血级联反应中的关键酶。因此，检测血液、 生物制品中的凝血酶有重要的意义。常用的检测凝血酶方法主要有光散色法[1J、测定血小 板聚集活性法、肉眼直接观察纤维蛋白原凝集法、荧光偏振法口1等。这些方法有的价格较 昂贵，有的则需要特殊的仪器，有的方法则准确度较低，较难推广。本文基于Aptamer 修饰的胶体金生物传感器检测凝血酶，简单方便、准确率高。 金纳米粒子在水中形成的分散系俗称胶体金，胶体金由于具有制备简单、性质稳定 及易于进行生物修饰等特点，己被广泛应用于化学、生物学及医学等众多领域9】’【4l。在 胶体金溶液中，金纳米粒子问的距离充分大于其直径时，体系呈红色，而当金纳米粒子 间距小于其平均直径时呈蓝色”l。本文利用凝血酶可与Apmmer结合的特点，将凝血酶加 入到Apmmer修饰的胶体金溶液中，由于凝血酶与Aptamer发生特异性的结合，可以缩 短胶体金之间的距离，溶液颜色由红色变蓝，吸收光谱发生红移。 首先利用柠檬酸钠还原方法制备胶体金，测其粒径略为12nm左右，然后参考文献【61 在胶体金表面修饰上特异性识别凝血酶的Aptamer，通过扫描其紫外吸收光谱可以发现其 体金表面。最后加入34nM凝血酶溶液反应，结果如图2所示，可发现最大吸收波长从 19rim。 524nm红移至643nm，变化了1 Waveletlgth／／im Uv-vis colloidalAu． Fig．1 +联系人：王柯敏．Tel：0731．8821566Fax：0731—8821566E-mail：k国世垫g堡bng。￡n 苫 《 Wavelenglh』tun colloidal modified thrombin；(2)with Uv-vis ofAptamer Au(1)without Fig．2 spectra thrombin 目前利用胶体金已经发展了一系列快速检测试纸，应用于结核病、病毒性肝炎、旱 早孕等的检测。利用本文介绍的方法有望发展一种新型的快速检测凝血酶的胶体金试纸。 致谢：本文工作承蒙以下基金资助：国家自然科学基金重点项目、国家 国家自然科学基金项目。 参考文献： 1．周靓，姜葵，赫荣乔等，生物纺銎学接1997，13(4)：531 2．蔡晓坤，徐顺清，张志仁等．分毋蹴{专 2002．30(3)：352 andLK 6 3．SFCheng Chau．Anal．Chem．，2003，75(1)：1 4．SG J Penn．LHe，MNatan。Current Biology，2003，7(5)：609 Opinion抽Chemical C A 5．TATaton，RMucic，CMirkin，etal，上Am．c^emSoc．，2000，122(26)：6305 A C 6．jJStorhoff，ALazafides，RMueie，etal，J．Am．Chem．Soc．，2000，122(19)：4640 BasedonColloidalAu ofThrombin Detee