基于自组装单层的K562细胞电化学传感器研究.pdfVIP

蔓垄曼全里受坌堑丝堂堂垄叁堡婆塞塑鐾整 曼皇些堂皇塑堡壁矍量竺塑坌堑丝堂 C娩基于自组装单层的K562细胞电化学传感器研究 郝臣 鞠娩先+丁霖 (南京大学化学化工学院，生命分析化学教育部重点实验室，南京210093) 细胞作为电化学活性体，其氧化还原中心可在电位扫描中产生电化学响应。本研究基于 肿瘤细胞特殊的电化学行为和生理活性，将电化学原理、实验方法与细胞、分子生物学技术 相互结合，对肿瘤细胞进行分析和表征。采用层层自组装技术，将K562自血病细胞修饰到玻 碳电极表面构建了K562细胞电化学传感器。利用循环伏安法和交流阻抗法等电化学方法研究 了K562的电化学行为。 1实验部分 仪器：循环伏安(CV)实验在CHI 730电化学分析仪(Co．CHI，U．S．A)上完成。 的三电极体系，以GCE裸电极及其修饰电极为工作电极，铂丝电极作为对电极， 饱和甘汞电极(SCE)为参比电极。 试剂：P-gP鼠抗人单克隆抗体(200 烷购于南京裕德恒偶联剂厂。其它试剂均为分析纯，使用前未经进一步纯化。 方法：将新鲜打磨并清洗好的玻碳电极(GCE)进行电化学预处理f¨。室温 下，将处理后的电极置于1．O％(v／v)的硅烷丙酮溶液中室温过夜，洗去物理吸附的 硅烷。氮气下吹干，取2pL P—gP鼠抗人单克隆抗体滴在上述硅烷化预处理的GCE 表面，在冰箱中4C保温24小时。二次水洗涤、吹干。在表面滴加2此K562 细胞液，在37℃下温育1．5小时。 1 二次水洗，凉干，备用。 1．0l 细胞培养：K562细胞置于含 ．．』 有1640培养液的培养瓶中，予37 k { ×一1．0 oc，5％c02的孵育箱中体外培养。 l 细胞生长达抑制期时，低速离心， ≤．．{ 7．4 弃去培养液，收集细胞，再用pH “。{ ．3,0 PBS漂洗2次。向沉淀中加入PBSl 稀释，调节细胞悬浊液浓度。 0 1。0 0。8 0．6 0．4 0．2 0．0 2结果与讨论 E／V(VS。SCE) 从图l可见， 细胞修饰电极 7．4 图l pH PBS缓冲液中(a)裸玻碳电极，(b)细 在0．742V处出现了一个不可逆的 胞修饰电极(c)抗体修饰电极(d)硅烷修饰电 极的循环 mV 氧化峰(曲线b)，对比其它四条曲 伏安图．扫速：50 s一． 270 第九届全国电分析化学学术会议论文摘要集 C电化学生物传惑器与生物分析化学 线，可知该氧化峰是来自于细胞的氧化，这说明如上层层组装的方法制备的K562 细胞电化学传感器是成功的。从理论上讲，电化学活性物质的电子传递速率或电 子传递阻抗与电极表面的性质密切相关。 用电化学阻抗图谱(EIS)测定了不同修饰电极的界面阻抗。由于细胞膜具有绝 缘性，吸附于电极表面的细胞在数量、生长状况、形态上的变化都会影响电极的 界面性质(电子传递电阻、电容等)，通过氧化还原探针能有效地检测到这些性质 的变化。 图2显示K3Fe(CN)6在裸电极表面电子传递很快，电子传递电阻(尺。，)仅266 Q，电极表面修饰了硅烷、抗体后其R“