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基于金胶纳米粒子壳聚糖膜固定HcG的免疫传感器研究 匿韭1，严枫2，鞠塌先。+ (I．南京大学生命分析化学教育部重点实验室，南京210093； 2．江苏省肿瘤医院，南京210009) kDa，是孕妇怀孕 HCG(人绒毛膜促性腺激素)是一种水溶性糖蛋白，分子量为37 期间胎盘滋养层合成的第一个糖蛋白。滋莽层肿瘤和大量非滋养层肿瘤也分泌该物质。 测量体液HCG含量对妊娠的早期诊断具有重要意义，并可用于各种胚胎滋养层肿瘤的监 测。 近年来，由于电化学免疫分析法无需使用放射性同位素．将免疫反应的高选择性和 电化学测定的高灵敏度相结合而越来越受到人们的重视，在临床检测中的有较好的发展 前途。本文利用改性壳聚糖结合金胶纳米粒子修饰膜，具有优良的导电性和生物亲合性， 将HCG抗原共价固定在玻碳电极表面，通过竞争免疫反应结合HRP标记HCG抗体，发 展了新型的HCG免疫传感器。利用HRP对邻苯二胺一过氧化氢体系的催化作用，采用 示差脉冲伏安法测定人血清中HCG抗原的含量。该传感器制各方便，性能稳定，实验表 明在临床应用上有良好的前景。 试剂与仪器：HCG检测试剂盒，牛血清白蛋白(BSA)，邻苯二胺，H202，其它试剂 均为分析纯，实验溶液用Milli．Q净化柱所采集的二次水配制。采用BASl00B电化学分 析仪和三电极系统进行电化学测定。参比和对电极分为为饱和甘汞和铂电极，工作电极 mM 7．0 为修饰玻碳电极。配制含有0．04％BSA和1．0 PBS为温育液和1％ EDTA的pH 壳聚糖的0．05M醋酸溶液。 HCG免疫传感器制备：玻碳电极(直径约为4mm)分别用粗砂纸、细砂纸、A1203悬 M 浊液抛光至镜面，用=次水超声处理后，采用电化学方法预处理，先在0．1 5．0的 pH PBS，中将玻碳电极上在1．75V电位下氧化300s，再将电极分别在+1．3—0．3 v之间循 环扫描30圈至得到稳定的循环伏安峰。氮气吹干电极。在电极表面滴涂5 uL改性壳聚 糖溶液，干燥后浸入金胶溶液中30 mlU／ml rain，取出滴涂3山300HCG，置于干燥器中 干燥。 免疫分析过程：将HCO电极浸入含有待测 始葡’忡 HCG抗原和适量HRP标记I-ICG抗体的溶液 ”“。：嚣”∥，毫掣●M” ‰ 中于330c温育50mira，用二次水清洗后在含 二二!】耍! 有2．0raM邻苯二胺和2．0mMH202的1．0mM l●％mId-∞¨ + PBS 7．0缓冲液中采用示差脉冲法进行测 pH 定。所有实验溶液均经高纯氮气通氮除氧 10min。 燮蝶 改性壳聚糖的表面性质：改性壳聚糖膜水解 溢 后，与电化学预处理后电极表面生成的羟基作 用生成氢键(图1)，交联的壳聚糖膜分布均 图1在电极表面形成交联壳聚糖膜 匀，具有良好的多孔结构，有利于吸附金胶纳米 粒子，进一步包裹HCG抗原分子。 金胶纳米溶液浸泡时间的选择：将壳