2.2.1　动物细胞培养和核移植技术 课件 人教版选修三.pptVIP

定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） 植物组织培养和动物细胞培养的比较： 5、体细胞核移植技术存在的问题 P50 （1）成功率非常低 （2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题 成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。 1.幼龄与老龄的组织细胞相比较，分化程度低的与分化程度高的细胞比较，哪一种更易于培养？为什么？ 细胞的衰老与动物机体的衰老有密切的关系，细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物则相反。 所以，幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样，组织细胞的分化程度越低，则增殖能力越强，所以更易于培养 2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？ 动物细胞培养不需经过脱分化过程。 因高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组织或细胞培养时的脱分化过程了 要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。 3.1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。 （1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？ * 动物细胞工程 2.2 动物细胞工程 常用技术手段 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段技术： 2.2.1动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 3、原理：细胞增殖 2、为什么要培养动物细胞？ 许多动物细胞能够分泌蛋白质，如抗体等。但是单个细胞分泌的蛋白质量是很少的，需要借助于大规模的动物细胞培养来实现。 动物细胞培养技术 动物细胞培养技术 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。 ①原代培养 4：过程 图示 原代培养 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 ②传代培养 ▲细胞株：传代细胞一般能传到40-50代，遗传物质一般不会发生改变，叫细胞株。 强调：细胞系、细胞株（了解即可，老课本体系） ▲细胞系：传代50代以后不能再传下去，部分细胞遗传物质发生了改变，能连续传代，获得不死性，叫细胞系。 4、总结：动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 为什么用胰蛋白酶处理？ 分瓶传代培养 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 细胞株：一般说遗传物质未改变 细胞系：遗传物质已改变 原代培养 细胞 悬浮液 细胞贴满瓶壁 50代 细胞 原代 培养 传代 培养 ⑴原代培养: 将动物组织消化后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 动物组织 单个细胞 细胞悬液 贴壁生长 分瓶培养 10代细胞 50代细胞 不死细胞 原代培养 传代培养 胰蛋白酶 剪碎 加培养液 接触抑制 少数癌变 少数 动物细胞培养技术流程 无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境。 5、体外培养动物细胞需要物质和环境条件 ⑴无菌、无毒的环境 ①对培养液、培养用具进行无菌处理； ②在培养液中加抗生素； ③定期更换培养液。 ⑵充足的营养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、血浆