蛋白灰度分析软件使用讲解.pptxVIP

蛋白灰度分析 蛋白灰度分析软件 蛋白灰度分析软件有：Image-Pro Plus，Quantity One，Image J 等~~ （1）Image-Pro Plus 综合性能最好，操作简便结果可靠！因为它有强大的IOD 算法，能准确反应蛋白灰度~~但需要靠魔棒或轨迹法选取目的蛋白区域，有一定的主观性，不过蛋白灰度测定本身就是半定量分析-----测量值本身就没有一定标准，不同软件测量值不同，即使相同软件重复测量数值也不一定相同，因此只要测定数值能反应目的蛋白变化趋势，测量值相对偏差不大即可~~~ （2） Quantity One ：有泳道-轨迹测定法，等高线/手绘选取目的区域测定法等方法 ⅰ.泳道-轨迹测定法：先剔除一系列背景，再选择泳道（lane），然后分析条带（band）,最后使用高斯建模得出灰度分析值（Gauss Model trace）特点：感觉比较科学，重复性好，但十分繁琐，而且有时不能正确反应灰度。 ⅱ.等高线-手绘选取目的区域测定法：通过等高线或手绘选取目的蛋白区域，最简便，但重复性不太好。 （3）Image J 最坑爹，它用魔棒选取区域测定灰度，可是有时很难选中所需区域，而且方法繁琐，不推荐！！ Image-Pro Plus 分析蛋白灰度教程 说明：目的蛋白的灰度=目的蛋白IOD 值/ 相应内参IOD 值 1. 使用Photoshop 剪切出目的区域（只含western bolt 条带，如图），保存为TIFF 格式文件。 2. Image-Pro Plus 打开文件，剔除背景： （1） 放大镜放大目的区域 （2） Measure---calibration---intensity---options----image,选择背景最大value 值------ok-------ok----system----close （3）Measure---count/size---measure---select measurements，选择IOD 为测量值，调整结果显示方式：Options-label style 改为mesurement，选择IOD 为显示值。 （4）接下来有2 种方法选择目的蛋白区域（即找出AOI，area of interest, IPP 核心元件）：魔棒和手绘轨迹法。 （5）count/size---edit-----convert AOI to object---得出IOD 值 （6）若测下一条带，则点NEW AOI 按钮，再按以上方法选择AOI（7）可以count/size---view---measurement data 显示或输出测量值 Thank you