染色体畸变分析青蒿素与蒿甲醚对鼻咽癌细胞株CNE-1放射增敏作用.doc

染色体畸变法分析青蒿素与蒿甲醚对鼻咽癌细胞株CNE-1放射增敏作用 崔丹 曹建平 潘麓羽 樊赛军 (苏州大学放射医学与公共卫生学院，苏州215123) 摘要 目的 研究比较青蒿素（artemisinin）和蒿甲醚（artemether）对人鼻咽癌细胞株CNE-1放射增敏作用。 方法 取对数生长期鼻咽癌CNE-1细胞，分为三组加药，青蒿素﹙5μmol/L﹚，蒿甲醚﹙20μmol/L﹚和空白对照组，每组分别用0、2、4、6 Gy四个剂量的 60Coγ射线照射，每个剂量三个平行样。常规染色体制片，用染色体畸变法分析青蒿素和蒿甲醚对CNE-1细胞放射增敏作用。 结果 同一剂量下青蒿素+辐射组和蒿甲醚+辐射组的细胞染色体畸变率明显高于单纯照射组，且蒿甲醚+辐射组染色体畸变率明显高于青蒿素+辐射组。结论 青蒿素与蒿甲醚都有辐射增敏的作用，且蒿甲醚的辐射增敏效果强于青蒿素。 【关键词】 青蒿素； 蒿甲醚；鼻咽癌细胞株CNE-1；放射增敏；染色体畸变法； 目前鼻咽癌患者的治疗仍以放射疗法为主，寻找高效低毒的放射增敏剂具有重要意义。青蒿素（Artemisinin）是具有过氧化基团结构的倍半萜内酯化合物，提取自黄花蒿叶中，蒿甲醚(artemether)为青蒿素衍生物之一，近年研究发现青蒿素类药物不仅是有效的抗疟药物，而且具有明显的抗肿瘤作用[1]，新近又发现其放射增敏作用[2]。染色体畸变（chromosome aberration ，CA）是反应电离辐射损伤效应的良好指标，染色体畸变分析作为一种灵敏可靠的生物计量剂被广泛应用。本实验采用鼻咽癌细胞株CNE-1为研究对象，60Coγ射线照射，旨在通过常规染色体畸变分析法检测青蒿素和蒿甲醚的放射增敏作用，分析细胞染色体畸变的剂量效应关系并得出两种药物放射增敏作用差异。 一.材料和方法 1.细胞株和培养 人鼻咽癌CNE-1细胞株购于中国科学院上海细胞库；DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）培养基购于美国Gibco公司；新生牛血清购于杭州四季青公司。CNE-1细胞接种于DMEM培养液（含10%新生牛血清和青、链霉素各100U/ml），在37 ℃、5%CO2培养箱中单层传代培养，取对数生长期细胞进行实验。 2.药物处理 青蒿素、蒿甲醚购于美国sigma公司。实验分三组，分别为青蒿素+辐射组、蒿甲醚+辐射组和单纯辐射即对照组，青蒿素终浓度为5μmol/L，蒿甲醚终浓度为20μmol/L。对数生长期细胞加药处理，加药后继续培养24h。 3.电离辐射 辐射源为60Coγ源，由苏州大学辐照中心提供。将细胞在室温下用60Coγ照射，每组分四个剂量照射，分别为0、2、4、6、8Gy，剂量率1Gy/min，每组每个剂量设三个平行样。 4.染色体标本制作 辐照后立即换培养液并加入秋水仙素（终浓度0.10μg/ml），继续培养24h后收获细胞，经过0．075 mol／L KC1于37 ℃低渗15分钟，加入现配固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）预固定，离心，加固定液固定，再离心，加入固定液再固定，离心后加少量固定液打匀，冰玻片滴片，Giemsa染色后制成染色体片。分析的畸变为双着丝粒体（dic）和着丝粒环（r），采用盲法阅片。 5.统计处理 采用SAS8.0统计软件分析数据，数据均以均数±标准差（X±SD）表示，按P0.05的水准作为检验标准。 二．结果 单纯辐射，青蒿素+辐射及蒿甲醚+辐射组人鼻咽癌CNE-1细胞染色体畸变率剂量效应比较见下表1 表1 青蒿素、蒿甲醚联合照射对CNE-1细胞染色体畸变率影响（±s，n=3） 辐射剂量(Gy) 分析细胞数 dic+r（%） 单纯辐射 青蒿素+辐射 蒿甲醚+辐射 0 400 0.00±0.00* 0.33±0.58* a 1.33±0.88* ab 2 200 7.67±0.76* 15.83±1.53* a 19.50±1.32*ab 4 200 28.00±2.29* 40.67±2.02* a 48.17±2.84*ab 6 200 54.83±3.21* 80.67±3.25* a 92.33±3.40*ab 0、2、4、6Gy组间两两比较,*P0.01; 同一辐射剂量下，分别与单纯辐射组比较,aP0.01; 青蒿素+辐射与蒿甲醚+辐射组比较，bP0.01; 由上表结果显示，三组中CNE-1细胞染色体畸变率均随辐射剂量增大而增加（P0.01），不同辐照剂量染色体畸变率差别有统计学意义。在2、4、6三个辐射剂量，同一剂量下青蒿素+辐射组和蒿甲醚+辐射组的细胞染色体畸变率都明显高于单纯照射组，且蒿甲醚+